应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒构建时连接的片段总是反方向，求助！
81/1返回列表
查看: 2961  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

devil2006

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒构建时连接的片段总是反方向，求助！

质粒构建时连接的片段总是反方向，验证10个已连接上目的片段的转化子，都是反向连接，请问各位虫友遇到过这种问题么？有没有好的解决方法呢，谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-27 13:27:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

★ ★
devil2006(金币+2): 我的下一步也是连接片段，可是这第一个片段方向反了，不能继续进行，我再多连几次吧，谢谢你 2011-08-27 17:41:15
dhd997(金币+2): good 2011-08-28 07:51:17
遇到过，而且我也做过很多次，我觉得片段连接到质粒上有一定的方向偏好性，最后我是加的酶切位点，以连接上目的片段的质粒为模板重新p的，因为我的下一步还是片段连接。我不知道你一步用来干什么，但是必须要反向的话很难的，但正向的几率也还是有的，主要靠运气吧，我同学有不断连接。。。得到的。
赞一下(1人) 回复此楼
生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
2楼2011-08-27 15:24:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
1楼: Originally posted by devil2006 at 2011-08-27 13:27:30:
质粒构建时连接的片段总是反方向，验证10个已连接上目的片段的转化子，都是反向连接，请问各位虫友遇到过这种问题么？有没有好的解决方法呢，谢谢！

楼主不是通过酶切位点连的，还是简单的TA克隆？
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
3楼2011-08-27 15:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

devil2006(金币+2): 我就是通过去磷酸化酶处理载体，然后连接的片段，请问如何能控制连接方向？谢谢啦 2011-08-27 17:44:40
用去磷酸化酶处理载体和DNA片段，可以控制连接方向
赞一下 回复此楼
一直向前！
4楼2011-08-27 17:13:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

devil2006

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-27 15:37:20:
楼主不是通过酶切位点连的，还是简单的TA克隆？

我是载体和片段单酶切，然后连接的，可是总是反向
赞一下 回复此楼
5楼2011-08-27 17:42:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by devil2006 at 2011-08-27 17:42:41:
我是载体和片段单酶切，然后连接的，可是总是反向

原来是这样，这个楼主可能要碰运气了吧！能不能再看一下，看能不能有双酶切位点！
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
6楼2011-08-27 17:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 可以试试 2011-08-27 21:14:57
dhd997(MolEPI+1): 追加 2011-08-28 07:51:59
devil2006(金币+6): 谢谢，我就是用个载体上的引物和基因的一个引物验证的，结果都是反向，是不是与载体和片段的结构有关啊？ 2011-08-28 08:41:18
正方几率都应该有的，还是筛选上下功夫吧。建议你做菌落PCR验证的时候不用要扩增基因的那对引物，用一个载体上的引物和基因的一个引物，这样能直接筛选出你要的正向连接的克隆。
赞一下(3人) 回复此楼
7楼2011-08-27 19:17:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-08-27 19:17:27:
正方几率都应该有的，还是筛选上下功夫吧。建议你做菌落PCR验证的时候不用要扩增基因的那对引物，用一个载体上的引物和基因的一个引物，这样能直接筛选出你要的正向连接的克隆。

正解呀
回复此楼
8楼2011-08-27 23:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 devil2006 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 23jxep3nCNZb 2026-09-14 6/300 2026-09-18 11:30 by HjTo14L7GlnE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 7/350 2026-09-18 10:30 by yS4CkeWDhD6V
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 9/450 2026-09-18 09:16 by yS4CkeWDhD6V
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 5BDX0d0WFp7t 2026-09-15 3/150 2026-09-18 03:16 by cITaGg3p5edr
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-18 02:30 by cITaGg3p5edr
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 6/300 2026-09-18 01:54 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-17 22:29 by cuPZTDXS3VOd
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 5/250 2026-09-17 14:05 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 23jxep3nCNZb 2026-09-14 5/250 2026-09-17 13:29 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 23jxep3nCNZb 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:27 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 yaCh4X3wd045 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:17 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-17 12:39 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 11:27 by UAIjTRMuUFoj
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-16 21:03 by MHf40yA0Uhyb
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-16 14:27 by i3KBRD19ERkG
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组｜2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭