| 查看: 2035 | 回复: 13 | |||
[交流]
【求助/交流】质粒构建步骤，回答的好，还有几十金币追加！！！！
|
|||
跪求S100A16-GST 质粒构建步骤，酶切位点EcoRⅠ和NheⅠ两个。各位虫友帮帮忙啊，老板急着要，实验室没人做这个....百感交集！！！！！ [ Last edited by rainwander on 2011-1-5 at 23:40 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有260人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 质粒构建
已经有13人回复
- 求助：约6kb质粒做模板的pcr程序怎么设定啊
已经有12人回复
- 我的质粒怎么回事，一直不好，请各位达人帮忙看一下
已经有21人回复
- 酶切质粒DNA选什么材料比较好？
已经有5人回复
- 关于DCC脱水反应后除DCC/DCU的问题~~~~~~188金币重奖，好的回答再追加金币~
已经有8人回复
- 构建好的质粒如何防止丢失
已经有12人回复
- 关于质粒的构建
已经有17人回复
- 做好的质粒如果用完了，用怎样的步骤繁殖新的，保证质粒的质量啊？
已经有5人回复
- 有做四苯基卟啉合成和硝化的虫友们请进来帮忙，100金币先~~~有好的回答继续追加~
已经有13人回复
- 求助质粒大提配方（自己配试剂）或哪家的质粒大提试剂盒更好
已经有7人回复
- 【求助/交流】构建质粒问题
已经有8人回复
- 【求助】催化剂负载量可以表征测量吗 回答满意追加金币~
已经有9人回复
- 求一段有关生物学中文翻译成英文 非诚勿扰（翻译得好，金币可追加，先谢过）
已经有5人回复
- 【求助】请教各位大哥大姐物质的合成，金币50，回答满意可追加金币30！
已经有12人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
测试█TEM/ EPR/ XPS/PY-GCMS/TG-IR/XRF/BET/MIP/核磁/EA/ICP，VX: 761711562。
+1/87
-
冷冻行星球磨机、低温高温球磨机
+1/86
-
福建师范大学招收2026年化学、材料硕士3-4名
+1/82
-
福建师范大学招收2026年化学、材料硕士3-4名
+1/78
-
华南师范大学（211）博士招生- 电子、自动化、机械、生物学、物理相关专业
+2/54
-
福建师范大学化学与材料学院杜克钊团队招生
+1/39
-
南开大学罗景山教授课题组招聘博士后（光/电催化、钙钛矿光伏方向）
+2/34
-
清华大学环境学院贺克斌院士团队招聘博士后
+1/33
-
招收调剂化学工程、计算机、资源与环境专业的研究生，调剂名额4-6名。
+1/33
-
【沈阳农业大学机械专硕调剂】
+2/30
-
北京理工大学-化学与化工学院-招收2026级博士生 [申请-考核制]
+1/18
-
【实战型】【生物医药】2026青岛大学招博士生 含少数民族骨干计划2名！！！
+1/14
-
（国家级人才团队 ）医药与生物技术方向 “申请-考核”制博士研究生招生
+1/8
-
中国民航飞行学院先进连接团队招收航空宇航、航空机械专业硕士研究生（学硕专硕均可）
+1/8
-
青岛科技大学高分子学院---生物大分子医学（BM3)团队---招收硕士生和博士生
+1/7
-
双一流天津工业大学电信学院李鸿强教授招收2026年申请审核制博士3名
+1/7
-
重庆大学药学院闫海龙课题组拟招收2026年申请考核制博士研究生
+1/5
-
中国石油大学（北京）国家级大人才团队博士招生3名：化学、材料、石油工程：油田化学
+1/4
-
海南大学徐月山老师招生第二批博士名额2~3个，2026年9月份入学（高端设备开发方向）
+1/3
-
招收理论凝聚态物理/纳米光学/量子计算方向博士、硕士研究生/博士后
+1/2
2楼2011-01-05 13:50:23
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-05 14:06:03
sc_truth(金币+1):虽然没有解释清楚我想要的，但是还是非常感激！ 2011-01-05 16:06:44
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-05 14:06:03
sc_truth(金币+1):虽然没有解释清楚我想要的，但是还是非常感激！ 2011-01-05 16:06:44
|
推荐给你一个软件，说不定能够帮上你进行设计，NoeClone,你可以在网上搜索下载的，然后设计目的基因的引物，PCR目的基因，双酶切目的基因和载体，胶回收，连接片段，转化细胞，鉴定质粒，电泳初检测，测序目的片段，在做实验之前最好搞清楚连接或者酶切会出错不，比如移位，位点插反等等 [ Last edited by feilr on 2011-1-5 at 14:07 ] |
3楼2011-01-05 14:03:49
4楼2011-01-05 15:07:12
5楼2011-01-05 16:03:09
6楼2011-01-05 16:17:54
7楼2011-01-05 20:03:03
8楼2011-01-05 22:47:58
★
silicare(金币+1):多看看文献，网友提供的步骤你敢用吗？ 2011-01-07 08:22:04
silicare(金币+1):多看看文献，网友提供的步骤你敢用吗？ 2011-01-07 08:22:04
|
但是上面只讲了原理呀，没有具体步骤哦，我想找份步骤借鉴借鉴。各位如果有的话，发至邮箱sc_truth@126.com，必有重谢！！！ |
9楼2011-01-07 00:12:16
rainwander:不是的啊，《分子克隆实验指南》主要讲的是方法步骤啊~~~ 2011-01-07 21:20:08
|
但是上面只讲了原理呀，没有具体步骤哦，我想找份步骤借鉴借鉴。各位如果有的话，发至邮箱sc_truth@126.com，必有重谢！！！ |
10楼2011-01-07 00:12:32
11楼2011-01-07 07:51:05
12楼2011-01-07 12:56:24
sc_truth(金币+6):非常感激，先学着，不懂的，再请教各位师兄师姐！感激不尽！ 2011-01-08 00:03:52
|
如果你觉得NheⅠ不常用的话，你也可以用点EcoRⅠ单酶切。 载体用EcoRⅠ单酶切后，在low melt上跑出，割胶回收。再用去磷酸化酶处理，防止自连。 然后你的pcr产物，跑出后，割胶回收，可以先直接与T载体（比如pcr2.1）相连。然后转到感受态里面，涂板。 挑取菌落，培养，做个小题质粒，用EcoRⅠ酶切，跑胶，割胶回收。这个过程就可以把目的基因切了下来，并且是EcoRⅠ粘性末端。 最后你就可以拿预先处理好的载体和切下来的基因做连接。转化，涂板。 用EcoRⅠ单酶切，相比你那个双酶切，劣势是，可能会出现假阳性。 不用菌落长的多的话肯定会有真的。一半一半。 |
13楼2011-01-07 23:17:39
简单回复
陈曦晨曦晨曦14楼
2012-03-12 16:40
回复
