应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于质粒的构建
181/2返回列表12下一页
查看: 2325  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

380218013

金虫 (小有名气)

[求助] 关于质粒的构建

小弟最近在做表达质粒的构建，由于目的片段较长（2700bp），根据载体上的酶切位点，将其分为四段，分别构建好之后，在逐一将其连接上。

遇到的问题：单独四个质粒构建好了，但是两两相互连接的时候却一直连接不上。（用NEB的T4连接酶10微升体系），求高手指点！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
好好生活，努力赚钱
1楼 2011-10-12 18:23:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

amisking: 2011-10-12 20:59:57
这个确实比较棘手一些。。。
祝你好运！
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-10-12 20:23:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-10-12 21:00:02
2.7 K，不算很长啊，完全可以一次连上去的，为什么要分几次，还是4次，工作量不是大了很多。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
3楼2011-10-12 20:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ruth_3912834

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是啊，我也觉得没必要分成四段，我们有6K的都直接构建。
赞一下 回复此楼
4楼2011-10-12 20:53:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-13 10:34:10
这个构建策略是你自己设计的，还是你的老板或者师兄师姐设计的？抑或你不仅仅是要将2.7K的片段连接到一个载体上去？
赞一下(1人) 回复此楼
致良知
5楼2011-10-12 22:19:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

直接买罗氏的一种高保真酶，扩增两千多不会突变，大概一千多一支，效果真不错。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2011-10-12 23:17:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-13 10:23:36
2.7 K，一点也不长啊，完全可以一次连上去的，6.8KB的我都做过，一次连，很方便的呀
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-10-12 23:21:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-13 10:34:18
没必要分4个吧。。。直接连吧你。连接时间加长试试？
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-10-13 10:02:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiwei_he

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以直接连的，你试试看
赞一下 回复此楼
nopains,nogains
9楼2011-10-13 11:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2011-10-12 20:48:46:
2.7 K，不算很长啊，完全可以一次连上去的，为什么要分几次，还是4次，工作量不是大了很多。

因为够的表达质粒，引物是固定的，用基因组的基因作为模板的，基因比较复杂，很难P出来自己要的目的的。要是以质粒什么的作为模板，那就是固定死的，很容易P。所以才分4段的。。现在4段都已经构建好，要连接起来。出问题了。
赞一下 回复此楼
好好生活，努力赚钱
10楼2011-10-13 15:31:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 380218013 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭