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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何根据已有质粒构建不同开放阅读框的质粒
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bluesea000

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何根据已有质粒构建不同开放阅读框的质粒

我的已有质粒是4.4kb，需要构建一个文库，用Sau 3A1 酶切后连接到质粒上，因为可能不是基因的正确阅读框表达，所以需要构建2个不同阅读框的质粒，求问做过的人如何构建哈
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1楼 2011-09-28 10:40:51
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-10-08 19:23:51
bluesea000(金币+5): O(∩_∩)O谢谢啦，我试着参考做做看 2011-10-28 16:51:42
一般这样做的都是钱多的不知道该怎么花的实验室的。
我以前的做法是在质粒其起始密码子后面找酶切位点，切断质粒以后插入人工合成的oligo序列。插入7个和8个的oligo序列就行了，至于这个是什么，只要你翻译出来的不是精氨酸，赖氨酸，天冬氨酸和谷氨酸，别的貌似都没有关系。
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可以用QQ找我……
2楼2011-10-04 16:18:57
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bluesea000

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by bluesea000 at 2011-09-28 10:40:51:
我的已有质粒是4.4kb，需要构建一个文库，用Sau 3A1 酶切后连接到质粒上，因为可能不是基因的正确阅读框表达，所以需要构建2个不同阅读框的质粒，求问做过的人如何构建哈

请问，你做的最后效果怎么样哈？一定要7-8个碱基吗？最多和最少要多少哈？
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3楼2011-10-08 14:22:53
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-10-09 16:22:24
bluesea000(金币+1): O(∩_∩)O谢谢补充~~~ 2011-10-28 16:53:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by bluesea000 at 2011-10-08 14:22:53:
请问，你做的最后效果怎么样哈？一定要7-8个碱基吗？最多和最少要多少哈？

我比较享福的是用的质粒都是前辈给整好了的，一般我都是在插入片段上面做修改，这个用PCR的手段比较容易达到，之所以让你加7-8个碱基是以前丁香园上面有人说这种短核苷酸比较容易连接（20min室温），不管是平头的还是粘性的。具体我真没操作过。你试试吧 应该不麻烦的
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可以用QQ找我……
4楼2011-10-09 10:37:43
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