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380218013金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】构建质粒问题 已有8人参与
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| 小弟构质粒时，涂布AMP平板有菌落，摇菌10H后菌液PCR有目的，但是小抽的时候发现沉淀的菌很少，所以小抽的浓度很低。 很困惑 不知道原因。请大虾指教。 |
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新人小玥
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2楼2011-04-16 22:58:48
blackrose8089
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3楼2011-04-17 15:33:25
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5楼2011-04-19 06:44:11
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6楼2011-04-19 09:00:37
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7楼2011-04-19 15:09:50
beibei9535
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晕晕小版主~ 姑娘你好！
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-04-19 19:01:38
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-04-19 19:01:38
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怎么很多同学有这个问题呢。 在构建质粒的时候，一定要选择好质粒和宿主的关系。 知道为什么pet32a最好选用的是BL21，为什么不是TOP10，不是DH5a 为什么与表达有关的修饰氨基酸的质粒反而用Rosseta做宿主最好？ 明白配套的商业化的这些知识后，就知道怎么考虑问题了。 第一，你这个求助，没有说明使用的什么质粒？是商业化的质粒，还是自己实验室自己够造的质粒。 第二，一般重组质粒都会遇见拷贝数问题。 所以会有人保守性的先用TOP10等扩增质粒。然后质粒转化到表达菌株中。 第三，含量很少，做PCR就够了，因为你要相信，指数增长是很吓人的，1ul的量就足以扩增出很多。 第四，GT116宿主会长菌长得很慢，但是比较不会染杂菌。故可以考虑延长时间培养等。 希望能帮到你！ |
8楼2011-04-19 16:32:20
9楼2011-04-19 18:23:35
