24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

380218013

金虫 (小有名气)

应助: 14 (小学生)
金币: 292.2
散金: 21
帖子: 267
在线: 50.3小时
虫号: 1185569
注册: 2011-01-07
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

[交流] 【求助/交流】构建质粒问题已有8人参与

小弟构质粒时，涂布AMP平板有菌落，摇菌10H后菌液PCR有目的，但是小抽的时候发现沉淀的菌很少，所以小抽的浓度很低。很困惑不知道原因。请大虾指教。

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

酶切问题已经有11人回复
质粒构建已经有13人回复
关于农杆菌单菌株/双质粒表达载体的构建问题已经有14人回复
构建好的质粒如何防止丢失已经有12人回复
关于质粒的构建已经有17人回复
重组质粒构建疑难问题已经有3人回复
【求助/交流】构建表达质粒已经有12人回复
【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～已经有16人回复
【求助/交流】质粒PCR产物的回收（质粒构建）已经有11人回复
【求助/交流】请教质粒构建问题已经有9人回复
【求助/交流】关于质粒构建与表达的问题已经有14人回复

好好生活，努力赚钱

1楼 2011-04-14 19:03:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

MolEPI: 7
应助: 15 (小学生)
贵宾: 1.093
金币: 4037.5
散金: 5916
红花: 76
沙发: 19
帖子: 3211
在线: 1083.4小时
虫号: 769521
注册: 2009-05-13
专业: 微生物学
管辖: 海外院所点评

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-04-19 19:01:38

引用回帖:

Originally posted by 380218013 at 2011-04-14 19:03:23:
小弟构质粒时，涂布AMP平板有菌落，摇菌10H后菌液PCR有目的，但是小抽的时候发现沉淀的菌很少，所以小抽的浓度很低。很困惑不知道原因。请大虾指教。

怎么很多同学有这个问题呢。
在构建质粒的时候，一定要选择好质粒和宿主的关系。
知道为什么pet32a最好选用的是BL21，为什么不是TOP10，不是DH5a
为什么与表达有关的修饰氨基酸的质粒反而用Rosseta做宿主最好？

明白配套的商业化的这些知识后，就知道怎么考虑问题了。

第一，你这个求助，没有说明使用的什么质粒？是商业化的质粒，还是自己实验室自己够造的质粒。
第二，一般重组质粒都会遇见拷贝数问题。
所以会有人保守性的先用TOP10等扩增质粒。然后质粒转化到表达菌株中。
第三，含量很少，做PCR就够了，因为你要相信，指数增长是很吓人的，1ul的量就足以扩增出很多。

第四，GT116宿主会长菌长得很慢，但是比较不会染杂菌。故可以考虑延长时间培养等。

希望能帮到你！