【求助/交流】构建质粒问题 - 分子生物 - 综合其他

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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-04-19 19:01:38

引用回帖:

Originally posted by 380218013 at 2011-04-14 19:03:23:
小弟构质粒时，涂布AMP平板有菌落，摇菌10H后菌液PCR有目的，但是小抽的时候发现沉淀的菌很少，所以小抽的浓度很低。很困惑不知道原因。请大虾指教。

怎么很多同学有这个问题呢。
在构建质粒的时候，一定要选择好质粒和宿主的关系。
知道为什么pet32a最好选用的是BL21，为什么不是TOP10，不是DH5a
为什么与表达有关的修饰氨基酸的质粒反而用Rosseta做宿主最好？

明白配套的商业化的这些知识后，就知道怎么考虑问题了。

第一，你这个求助，没有说明使用的什么质粒？是商业化的质粒，还是自己实验室自己够造的质粒。
第二，一般重组质粒都会遇见拷贝数问题。
所以会有人保守性的先用TOP10等扩增质粒。然后质粒转化到表达菌株中。
第三，含量很少，做PCR就够了，因为你要相信，指数增长是很吓人的，1ul的量就足以扩增出很多。

第四，GT116宿主会长菌长得很慢，但是比较不会染杂菌。故可以考虑延长时间培养等。

希望能帮到你！