应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教质粒构建问题
101/1返回列表
查看: 1717  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教质粒构建问题 已有9人参与

我有一个6kb左右的片段要连到载体上，而载体的大小只有5kb多，最近我用片段与载体比例大约为1:2-1:3进行连接，但一直没有得到克隆，请问是不是这样的比例不行，我该用多少的比例进行连接？谢谢指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-30 01:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-30 08:34:48
外源片段要多些，即便你的外源片段较载体大。你的比例好像反过来差不多。
如果还连不上，就采用把体系做的浓点，转化时多转点。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-11-30 08:31:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

littlehong

木虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-30 08:35:07
连接的时候，比例应该是片段：质粒=5：1，或者更高才行
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-11-30 08:33:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个有严格的比例限制吗？应该是构建好的质粒大小不要太大就ok了吧。
赞一下(1人) 回复此楼
严于律己，宽以待人
4楼2010-11-30 09:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyl19860712

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒和片段比例应该是1:5到1：8，片段应该多些，片段和质粒都要纯。质粒和片段比例计算：质粒/片段（摩尔比例）=A，质粒/片段(分子质量)＝Ｂ，质粒浓度／片段浓度（ｎｇ／ｕｌ）＝Ｃ，　质粒/片段(体积)＝ｘ，则ｘ＝ＡＢ／Ｃ。
质粒和片段浓度可以根据ＭＡＲＫＥＲ大概估算，其实没那么精确，但也不能随便加
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-11-30 10:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
片段大小差不多。按载体：片段1:3做差不多。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-11-30 12:14:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
因为两个长度差不多，所以连接比不用太离谱，1:1~1:3都可以
个人建议4度过夜连
赞一下 回复此楼
7楼2010-11-30 12:48:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lyl19860712 at 2010-11-30 10:35:12:
质粒和片段比例应该是1:5到1：8，片段应该多些，片段和质粒都要纯。质粒和片段比例计算：质粒/片段（摩尔比例）=A，质粒/片段(分子质量)＝Ｂ，质粒浓度／片段浓度（ｎｇ／ｕｌ）＝Ｃ，　质粒/片段(体积)＝ｘ，则ｘ ...

两者的比例跟连接效率有关，如果做的次数和量够多的话，比例不是最关键的，酶切倒是影响很大。
赞一下 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
8楼2010-11-30 13:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwdxx2004

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果感受态效率没有问题的话，连接的比例可以是片段比载体为2:1~1:1试试，确保片段和载体的浓度，祝试验顺利！
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-11-30 15:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个你得跑电泳看看你的片段和质粒的亮度，但是一般DNA是多一些，载体少一些！
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
10楼2010-11-30 16:16:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huangqihong 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 0703求调剂 +7 jtyq001 2026-03-10 7/350 2026-03-14 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 一志愿：武汉理工，材料工程，英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭