应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教质粒构建问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 1752  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

huangqihong

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[交流] 【求助/交流】请教质粒构建问题 已有9人参与

我有一个6kb左右的片段要连到载体上，而载体的大小只有5kb多，最近我用片段与载体比例大约为1:2-1:3进行连接，但一直没有得到克隆，请问是不是这样的比例不行，我该用多少的比例进行连接？谢谢指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-30 01:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iaminxanadu

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-30 08:34:48
外源片段要多些，即便你的外源片段较载体大。你的比例好像反过来差不多。
如果还连不上，就采用把体系做的浓点，转化时多转点。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-11-30 08:31:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

littlehong

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-30 08:35:07
连接的时候，比例应该是片段：质粒=5：1，或者更高才行
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-11-30 08:33:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最爱花诗雨

实习版主

穷鬼

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个有严格的比例限制吗？应该是构建好的质粒大小不要太大就ok了吧。
赞一下(1人) 回复此楼
严于律己，宽以待人
4楼2010-11-30 09:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyl19860712

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒和片段比例应该是1:5到1：8，片段应该多些，片段和质粒都要纯。质粒和片段比例计算：质粒/片段（摩尔比例）=A，质粒/片段(分子质量)＝Ｂ，质粒浓度／片段浓度（ｎｇ／ｕｌ）＝Ｃ，　质粒/片段(体积)＝ｘ，则ｘ＝ＡＢ／Ｃ。
质粒和片段浓度可以根据ＭＡＲＫＥＲ大概估算，其实没那么精确，但也不能随便加
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-11-30 10:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
片段大小差不多。按载体：片段1:3做差不多。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-11-30 12:14:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
因为两个长度差不多，所以连接比不用太离谱，1:1~1:3都可以
个人建议4度过夜连
赞一下 回复此楼
7楼2010-11-30 12:48:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
Originally posted by lyl19860712 at 2010-11-30 10:35:12:
质粒和片段比例应该是1:5到1：8，片段应该多些，片段和质粒都要纯。质粒和片段比例计算：质粒/片段（摩尔比例）=A，质粒/片段(分子质量)＝Ｂ，质粒浓度／片段浓度（ｎｇ／ｕｌ）＝Ｃ，　质粒/片段(体积)＝ｘ，则ｘ ...

两者的比例跟连接效率有关，如果做的次数和量够多的话，比例不是最关键的，酶切倒是影响很大。
赞一下 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
8楼2010-11-30 13:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwdxx2004

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果感受态效率没有问题的话，连接的比例可以是片段比载体为2:1~1:1试试，确保片段和载体的浓度，祝试验顺利！
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-11-30 15:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

禁虫

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个你得跑电泳看看你的片段和质粒的亮度，但是一般DNA是多一些，载体少一些！
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
10楼2010-11-30 16:16:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huangqihong 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂：一志愿：南京大学 专业：0705 总分320 ，本科985，四六级已过 +3 lfy760306 2026-03-31 3/150 2026-04-01 01:57 by Creta
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +10 GENJIOW 2026-03-31 10/500 2026-04-01 01:30 by 1018329917
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 海纳百川Ly 2026-03-29 6/300 2026-03-31 21:06 by yuq
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 070300化学求调剂 +12 小黄鸭宝 2026-03-30 12/600 2026-03-31 19:15 by 253863592
[考研] 086000生物与医药 初试274求调剂 +4 小叮当来了 2026-03-30 4/200 2026-03-31 16:48 by shengliu165
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 麦恩莉. 2026-03-30 4/200 2026-03-31 14:35 by 记事本2026
[考研] 求调剂 +8 11ggg 2026-03-30 8/400 2026-03-31 13:56 by nanaliuyun
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135，现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考研] 297求调剂 +17 田洪有 2026-03-26 18/900 2026-03-30 18:32 by nothing投稿中
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +6 王一一依依 2026-03-30 8/400 2026-03-30 11:52 by yjolah
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 339求调剂，想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 340求调剂 +5 jhx777 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:18 by fmesaito
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[有机交流] 高温高压反应求助 10+4 chibby 2026-03-25 4/200 2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭