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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教质粒构建问题
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huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教质粒构建问题已有9人参与

我有一个6kb左右的片段要连到载体上，而载体的大小只有5kb多，最近我用片段与载体比例大约为1:2-1:3进行连接，但一直没有得到克隆，请问是不是这样的比例不行，我该用多少的比例进行连接？谢谢指教！
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1楼2010-11-30 01:34:26
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个有严格的比例限制吗？应该是构建好的质粒大小不要太大就ok了吧。
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严于律己，宽以待人
4楼2010-11-30 09:24:13
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-30 08:34:48
外源片段要多些，即便你的外源片段较载体大。你的比例好像反过来差不多。
如果还连不上，就采用把体系做的浓点，转化时多转点。
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2楼2010-11-30 08:31:54
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littlehong

木虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-30 08:35:07
连接的时候，比例应该是片段：质粒=5：1，或者更高才行
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3楼2010-11-30 08:33:40
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lyl19860712

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒和片段比例应该是1:5到1：8，片段应该多些，片段和质粒都要纯。质粒和片段比例计算：质粒/片段（摩尔比例）=A，质粒/片段(分子质量)＝Ｂ，质粒浓度／片段浓度（ｎｇ／ｕｌ）＝Ｃ，　质粒/片段(体积)＝ｘ，则ｘ＝ＡＢ／Ｃ。
质粒和片段浓度可以根据ＭＡＲＫＥＲ大概估算，其实没那么精确，但也不能随便加
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5楼2010-11-30 10:35:12
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