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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】构建质粒问题
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380218013

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】构建质粒问题 已有8人参与

小弟构质粒时，涂布AMP平板有菌落，摇菌10H后菌液PCR有目的，但是小抽的时候发现沉淀的菌很少，所以小抽的浓度很低。 很困惑 不知道原因。请大虾指教。
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1楼 2011-04-14 19:03:23
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
传说适当提高抗生素水平，延长培养时间可以增加拷贝
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4楼2011-04-17 19:05:39
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新人小玥

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
载体可能是低拷贝吧，这样长的比较慢
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2楼2011-04-16 22:58:48
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-04-19 08:26:28
建议楼主摇菌时间延长，我们用的Pet28a和MBP有时也遇到这样的问题，就过夜摇菌。
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jiayoubashaonian
3楼2011-04-17 15:33:25
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-04-19 08:26:47
是不是拷贝数太低了
可以延长培养时间，多收集几次菌体
然后用试剂盒里边的柱子，收集质粒
把几个管都过到一个柱子里边
然后洗脱
最近提过一个18kb的低拷贝的质粒，就这样做的，效果很好
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5楼2011-04-19 06:44:11
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