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380218013

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】构建质粒问题 已有8人参与

小弟构质粒时,涂布AMP平板有菌落,摇菌10H后菌液PCR有目的,但是小抽的时候发现沉淀的菌很少,所以小抽的浓度很低。 很困惑 不知道原因。请大虾指教。
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
传说适当提高抗生素水平,延长培养时间可以增加拷贝
4楼2011-04-17 19:05:39
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新人小玥

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
载体可能是低拷贝吧,这样长的比较慢
2楼2011-04-16 22:58:48
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-04-19 08:26:28
建议楼主摇菌时间延长,我们用的Pet28a和MBP有时也遇到这样的问题,就过夜摇菌。
jiayoubashaonian
3楼2011-04-17 15:33:25
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-04-19 08:26:47
是不是拷贝数太低了
可以延长培养时间,多收集几次菌体
然后用试剂盒里边的柱子,收集质粒
把几个管都过到一个柱子里边
然后洗脱
最近提过一个18kb的低拷贝的质粒,就这样做的,效果很好
5楼2011-04-19 06:44:11
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