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380218013

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】构建质粒问题已有8人参与

小弟构质粒时，涂布AMP平板有菌落，摇菌10H后菌液PCR有目的，但是小抽的时候发现沉淀的菌很少，所以小抽的浓度很低。很困惑不知道原因。请大虾指教。

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好好生活，努力赚钱

1楼 2011-04-14 19:03:23

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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

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专业: 环境微生物学

★
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传说适当提高抗生素水平，延长培养时间可以增加拷贝

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4楼2011-04-17 19:05:39

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新人小玥

木虫 (正式写手)

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专业: 林木遗传育种学

★
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载体可能是低拷贝吧，这样长的比较慢

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2楼2011-04-16 22:58:48

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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

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专业: 植物学研究的新技术、新方

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dhd997(金币+2): good 2011-04-19 08:26:28

建议楼主摇菌时间延长，我们用的Pet28a和MBP有时也遇到这样的问题，就过夜摇菌。

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jiayoubashaonian

3楼2011-04-17 15:33:25

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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

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dhd997(金币+3): good 2011-04-19 08:26:47

是不是拷贝数太低了
可以延长培养时间，多收集几次菌体
然后用试剂盒里边的柱子，收集质粒
把几个管都过到一个柱子里边
然后洗脱
最近提过一个18kb的低拷贝的质粒，就这样做的，效果很好

赞一下(2人)

5楼2011-04-19 06:44:11

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