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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于质粒的构建
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380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-10-12 22:19:39:
这个构建策略是你自己设计的，还是你的老板或者师兄师姐设计的？抑或你不仅仅是要将2.7K的片段连接到一个载体上去？

老板设计的。 就是要2.7K片段连接到一个载体上，构建一个表达质粒。转染进细胞让其高表达这个基因编码的蛋白。。
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好好生活，努力赚钱
11楼2011-10-13 15:33:43
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380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 天使托 at 2011-10-12 20:23:14:
这个确实比较棘手一些。。。
祝你好运！

谢谢！！
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好好生活，努力赚钱
12楼2011-10-13 15:34:20
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churchill87426

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不知道LZ连接条件？
我们用takara T4都是16度过夜，蛮好的。我连的2200bp,用的是全式金高保真的fastpfu,保真度和扩增速度很好。比宝生物的primestar好。
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13楼2011-10-13 18:45:10
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cloverplm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

估计连接的效率跟你的基因特性有关，实在不行你就选择让公司去做subclone, 或者买那种cloneEZ 的试剂盒连接试试。祝好运~！
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

380218013
净——静——竞——进
14楼2011-10-13 21:06:17
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380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by churchill87426 at 2011-10-13 18:45:10:
不知道LZ连接条件？
我们用takara T4都是16度过夜，蛮好的。我连的2200bp,用的是全式金高保真的fastpfu,保真度和扩增速度很好。比宝生物的primestar好。

T4室温2小时！或者4°过夜的  一般都是室温2小时。一个实验室的 有时候只要室温30分钟就OKl  ..
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15楼2011-10-14 21:07:46
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380218013

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by cloverplm at 2011-10-13 21:06:17:
估计连接的效率跟你的基因特性有关，实在不行你就选择让公司去做subclone, 或者买那种cloneEZ 的试剂盒连接试试。祝好运~！

en  可能吧  是在做不出来只能给公司做了。。只是自己做了一半的工作了，有点不甘心。。。谢谢
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16楼2011-10-14 21:09:32
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春草2

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-15 23:30:30
可以提一个高质量的genomic DNA。当然同时你可以摸一下pcr的条件。
对于为什么要4片段连。还是没有说明的很清楚。
这两件事，不会有冲突。
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17楼2011-10-15 23:00:02
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dl00bern

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-15 23:46:14
如果你的基因全长很难扩的话，我觉得可以通过PCR分别将目的基因两段两段连接起来，最后再PCR将连接好的两段连接起来，最后再连入载体。这样需要设计的引物会比较多，但是对于比较棘手的例如楼主的实验来说会比较行的通。
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18楼2011-10-15 23:42:19
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