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380218013

金虫 (小有名气)

应助: 14 (小学生)
金币: 292.2
散金: 21
帖子: 267
在线: 50.3小时
虫号: 1185569
注册: 2011-01-07
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 关于质粒的构建

小弟最近在做表达质粒的构建，由于目的片段较长（2700bp），根据载体上的酶切位点，将其分为四段，分别构建好之后，在逐一将其连接上。

遇到的问题：单独四个质粒构建好了，但是两两相互连接的时候却一直连接不上。（用NEB的T4连接酶10微升体系），求高手指点！！

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好好生活，努力赚钱

1楼2011-10-12 18:23:06

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churchill87426

木虫 (正式写手)

应助: 11 (小学生)
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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

不知道LZ连接条件？
我们用takara T4都是16度过夜，蛮好的。我连的2200bp,用的是全式金高保真的fastpfu,保真度和扩增速度很好。比宝生物的primestar好。

13楼2011-10-13 18:45:10

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