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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于构建重组质粒 已有2人参与

我最近在构建一个重组质粒,将转座质粒单酶切后,需要去磷酸化,我是用CIAP去磷酸化的,37度处理了4小时,takara的产品。然后和目的基因片段连接。但就是连不上去,很纠结啊。希望各位前辈给予指教,谢谢了
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

还要补充一下,转化以后,有菌长出,做菌落PCR没有扩增出目标条带。后来提质粒,竟然也没有,解释为染菌了。还要其他的可能吗
2楼2010-05-15 21:01:17
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

帮帮忙啊
3楼2010-05-17 11:14:45
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-17 15:35:57
我们通常在I酶切反应液中加入碱性磷酸酶(终浓度10-30 U/μL),混匀后,在37℃水浴中放置30分钟。你用的时间可能太长了点。
4楼2010-05-17 11:28:46
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