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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于构建重组质粒
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于构建重组质粒 已有2人参与

我最近在构建一个重组质粒，将转座质粒单酶切后，需要去磷酸化，我是用CIAP去磷酸化的，37度处理了4小时，takara的产品。然后和目的基因片段连接。但就是连不上去，很纠结啊。希望各位前辈给予指教，谢谢了
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1楼 2010-05-15 20:58:40
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weiminhb

铁虫 (小有名气)
还要补充一下，转化以后，有菌长出，做菌落PCR没有扩增出目标条带。后来提质粒，竟然也没有，解释为染菌了。还要其他的可能吗
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2楼2010-05-15 21:01:17
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weiminhb

铁虫 (小有名气)
帮帮忙啊
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3楼2010-05-17 11:14:45
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-17 15:35:57
我们通常在I酶切反应液中加入碱性磷酸酶（终浓度10-30 U/μL），混匀后，在37℃水浴中放置30分钟。你用的时间可能太长了点。
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4楼2010-05-17 11:28:46
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