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关于质粒的构建
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关于质粒的构建
小弟最近在做表达质粒的构建,由于目的片段较长(2700bp),根据载体上的酶切位点,将其分为四段,分别构建好之后,在逐一将其连接上。
遇到的问题:单独四个质粒构建好了,但是两两相互连接的时候却一直连接不上。(用NEB的T4连接酶10微升体系),求高手指点!!
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2011-10-12 18:23:06
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wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-10-13 10:23:36
2.7 K,一点也不长啊,完全可以一次连上去的,6.8KB的我都做过,一次连,很方便的呀
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7楼
2011-10-12 23:21:44
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amisking: 2011-10-12 20:59:57
这个确实比较棘手一些。。。
祝你好运!
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼
2011-10-12 20:23:14
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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流! 2011-10-12 21:00:02
2.7 K,不算很长啊,完全可以一次连上去的,为什么要分几次,还是4次,工作量不是大了很多。
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Thank-you,so-blue.
3楼
2011-10-12 20:48:46
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【答案】应助回帖
是啊,我也觉得没必要分成四段,我们有6K的都直接构建。
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4楼
2011-10-12 20:53:40
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