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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒构建步骤，回答的好，还有几十金币追加！！！！
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sc_truth

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】质粒构建步骤，回答的好，还有几十金币追加！！！！

跪求S100A16-GST 质粒构建步骤，酶切位点EcoRⅠ和NheⅠ两个。各位虫友帮帮忙啊，老板急着要，实验室没人做这个....百感交集！！！！！

[ Last edited by rainwander on 2011-1-5 at 23:40 ]
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1楼 2011-01-05 13:43:02
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alexguo221

金虫 (初入文坛)
sc_truth(金币+2):大致过程清楚了。我拿到的质粒用的是EcoRⅠ和NheⅠ两个酶切位点，但是NheⅠ毕竟不常用，所以要重新PCR一次。但是我仅知道这多，请教一下，下面的步骤，大致要怎么设计呢？ 2011-01-07 15:44:16
载体和目的片段都用这两个酶，酶切。2h左右。然后跑一个low melt胶。割胶回收，取样做连接。室温放置几个小时。然后再转化。最后挑取菌落，培养，鉴定。
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12楼2011-01-07 12:56:24
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feng__

金虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-05 14:05:59
载体和片段都用那2个酶进行酶切，回收后连接，转化，挑克隆，鉴定，木了
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2楼2011-01-05 13:50:23
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feilr

木虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-05 14:06:03
sc_truth(金币+1):虽然没有解释清楚我想要的，但是还是非常感激！ 2011-01-05 16:06:44
推荐给你一个软件，说不定能够帮上你进行设计，NoeClone,你可以在网上搜索下载的，然后设计目的基因的引物，PCR目的基因，双酶切目的基因和载体，胶回收，连接片段，转化细胞，鉴定质粒，电泳初检测，测序目的片段，在做实验之前最好搞清楚连接或者酶切会出错不，比如移位，位点插反等等

[ Last edited by feilr on 2011-1-5 at 14:07 ]
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3楼2011-01-05 14:03:49
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
版主说不好用“跪求”
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4楼2011-01-05 15:07:12
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