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飞侠8683

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确,提取的质粒却比空质粒还小?

这段时间做的连接转化到DH5α后,挑取单菌落进行PCR,能扩出目的片段,但是进一步提取质粒后跑电泳却比空质粒还小,跑到前面去了,是什么原因呢?好几次都是这样?
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ben1147

木虫 (正式写手)


★ ★
飞侠8683(金币+1): 2010-12-06 14:40:53
dhd997(金币+2):good 2010-12-06 15:54:24
质粒单酶切了么?
重组质粒和空质粒都单酶切成线性片段再比较大小
重组质粒还可以双酶切把插入片段切下来看看大小对不对
菌落PCR不如质粒酶切鉴定准确
2楼2010-12-06 14:19:59
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飞侠8683

新虫 (小有名气)


谢谢!我现在也只能酶切试试看
3楼2010-12-06 14:41:39
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)


飞侠8683(金币+1): 2010-12-07 09:24:17
质粒的问题,线性,环状,跑的速度也不一样
4楼2010-12-06 16:37:12
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head2004

新虫 (初入文坛)


我之前也做过菌落PCR鉴定,本来是没有连接成功,但PCR出来结果却有目的片段大小的条带,所以说菌落PCR并不是很可信。
建议最好是提质粒酶切鉴定,虽然麻烦一些
5楼2010-12-09 11:46:43
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