应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做连接后的质粒是否可以用来做pcr
111/2返回列表12下一页
查看: 1918  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

manman424

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-01-12 10:48:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xulanzzz

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-12 15:56:38
连接的产物可以直接PCR来验证是否连接成功，但是唯一的问题就是若仅有一点连接成功的话就可以PCR出阳性结果，但是能否转化成功就有很多因素，比如感受态效率等等，连接产物PCR就以连接产物做模板，模板量1微升足够，常规PCR即可。。。
赞一下(2人) 回复此楼
DOBEST
2楼2011-01-12 10:52:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-12 15:56:43
可以直接作为PCR模板的，有的人推荐单酶切处理后作模板。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-01-12 15:52:34
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
为啥还要酶切质粒 再连接呢  直接pcr 不就行么
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2011-01-12 18:46:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

manman424

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2011-01-13 09:08:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

manman424

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2011-01-13 09:09:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

manman424

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2011-01-13 09:10:33
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xulanzzz

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 10:09:44
引用回帖:
Originally posted by manman424 at 2011-01-13 09:08:12:




谢谢了，还有点问题想请教你，昨天对连接液进行了电泳检测，从6000多bp到2000多bp都有条带，因为我的目的质粒（大小在2000bp左右）原来是单酶切EcoRI处理过的，因该是出现了自连，两个或三个连接在一起， ...

连接液电泳检测很明显是不明智的，毕竟只要有连接上的，转化效率够好就能够挑出转化子，但是跑电泳少量的连接上的肯定是看不见的。再说你用的是单酶切，就有很多自连发生，挑转化子还是比较困难的。。。。

[ Last edited by xulanzzz on 2011-1-13 at 09:24 ]
赞一下(2人) 回复此楼
DOBEST
8楼2011-01-13 09:23:48
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

manman424

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
9楼2011-01-13 10:07:41
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by manman424 at 2011-01-13 09:09:08:



因为要保证目的质粒的完整性，否则pcr时p出的东西不能用

说句实话完全没有必要的   话说我从来都是直接从质粒上pcr的  我现在构建了快100多个质粒了 没有问题!
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
10楼2011-01-13 11:41:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 manman424 的主题更新
111/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +12 爱看书的可乐 2026-08-26 14/700 2026-08-26 13:50 by coolysnow
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +26 yaoyewhu2008 2026-08-20 28/1400 2026-08-26 13:49 by zzuzxg
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 系统查不到 +9 董八千 2026-08-26 9/450 2026-08-26 12:30 by yanmofang
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +22 koalala 2026-08-24 25/1250 2026-08-26 11:14 by dxcharlary
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 出来了 +8 trojank 2026-08-26 8/400 2026-08-26 09:00 by gxc
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +21 羊腰板 2026-08-21 24/1200 2026-08-26 07:20 by finnigan
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭