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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒DNA提取后的PCR
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yourandeziwo

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒DNA提取后的PCR 已有10人参与

我前几天做了下大肠杆菌质粒DNA的提取情况，然后想做下跑胶回收，但是跑胶之前，我想做下PCR，哪位朋友有这方面的实验资料或者什么的么？先谢谢了。
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和虫友们一起进步。。
1楼 2010-04-27 19:51:41
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★
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不太明白你想说啥
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2楼2010-04-27 21:23:21
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zhongy1985

木虫 (小有名气)
★
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呵呵，是有关PCR的资料么？
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3楼2010-04-27 21:36:03
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做任何实验之前要先明确你的目的是什么。不太明白你电泳之前PCR的目的。
PCR鉴定吗？
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
4楼2010-04-27 21:40:30
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yourandeziwo

金虫 (小有名气)
我是想问问我提的DNA跑胶之前，还需要扩增么？我的浓度不是很高，(0.085),还有就是PCR扩增相关的资料。有谁能给简单的实验么。资料。。谢谢了
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和虫友们一起进步。。
5楼2010-04-27 21:41:41
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yourandeziwo

金虫 (小有名气)
我原来学药，没有做过这方面的东西。老板让做生物相关东西，现在组里也没有做这方面东西的。我才开始做，算是练手，我想从大厂杆菌里面提DNA，PCR扩增，跑胶，回收。。这是我的打算。。
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和虫友们一起进步。。
6楼2010-04-27 21:44:57
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1110rainjob

铜虫 (小有名气)
★
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-27 22:45
我不知道我理解的是否正确，你是想从质粒DNA中扩增你的目的基因，然后把扩增产物跑胶回收获得目的基因，是吧？
如果是这样，那么你可以初步先采用下面这个PCR体系：1ul引物1，1ul引物2，2ul质粒DNA，2ul dNTP，0.5ul Ex Taq酶，5ul buffer，加入ddH2O补足总体系为50ul。注意加各种试剂的顺序：先加体积最大的ddH2O，然后是buffer、引物、DNA和dNTP，最后加酶。记得混匀体系。
上面的体系是较为粗放的，你可以先尝试一下，然后根据PCR的结果再调整更适宜的体系。
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7楼2010-04-27 21:59:11
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wwllkkhh

金虫 (小有名气)
★
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楼上说的很清楚！不错
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牛~逼~哄~哄
8楼2010-04-27 22:56:23
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pidou213

木虫 (正式写手)
★
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不过还真没有见过你这样做的，你觉得DNA/质粒较少的话，可以诱导一下或者多培养一点菌再提不就好了吗/？


做PCR反而更麻烦呢？并且有可能有假阳性也说不准啊
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见得多爱的多
9楼2010-04-27 23:51:01
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lls850225

银虫 (小有名气)
★
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应该先培养多了在提取，然后做PCR，按照六楼的加，然后别忘了加模板和镁离子，如果你的buffer中没有镁离子的话~
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10楼2010-04-28 10:35:37
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