24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yourandeziwo

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1030.9
散金: 35
红花: 1
帖子: 118
在线: 110.8小时
虫号: 961186
注册: 2010-03-04
专业: 功能与智能高分子

[交流] 【求助/交流】质粒DNA提取后的PCR已有10人参与

我前几天做了下大肠杆菌质粒DNA的提取情况，然后想做下跑胶回收，但是跑胶之前，我想做下PCR，哪位朋友有这方面的实验资料或者什么的么？先谢谢了。

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

救命啊！荧光定量PCR 扩增问题已经有15人回复
DNA提取问题求解已经有21人回复
菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助已经有31人回复
质粒DNA提取成了这样，请大家帮忙分析一下已经有27人回复
标准菌株建立荧光定量PCR的标准曲线已经有5人回复
荧光定量PCR中模板采用直接提取的DNA与构建目标片段质粒模板有什么区别？已经有6人回复
酵母质粒转化及提取验证问题求助已经有12人回复
【求助/交流】质粒DNA可以不通过酶切直接跑电泳检测吗？已经有24人回复
【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下已经有4人回复
【求助/交流】提取的DNA在-20℃下保存后，怎样解冻？已经有31人回复
【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带已经有7人回复
【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非� 已经有11人回复

和虫友们一起进步。。

1楼2010-04-27 19:51:41

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

1110rainjob

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 434.4
帖子: 113
在线: 24.1小时
虫号: 899393
注册: 2009-11-10
专业: 生物技术药物

★
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-27 22:45

我不知道我理解的是否正确，你是想从质粒DNA中扩增你的目的基因，然后把扩增产物跑胶回收获得目的基因，是吧？
如果是这样，那么你可以初步先采用下面这个PCR体系：1ul引物1，1ul引物2，2ul质粒DNA，2ul dNTP，0.5ul Ex Taq酶，5ul buffer，加入ddH2O补足总体系为50ul。注意加各种试剂的顺序：先加体积最大的ddH2O，然后是buffer、引物、DNA和dNTP，最后加酶。记得混匀体系。
上面的体系是较为粗放的，你可以先尝试一下，然后根据PCR的结果再调整更适宜的体系。