24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2577  |  回复: 5
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊

表达载体构建好以后,转化进pET29a,从转化子中重新提取质粒,发现质粒大小部队了,打了大约600bp,但是酶切验证还是有我连上去的目的片段,太纠结了!!
有没有给解释下的啊~~~
郁闷中
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-13 16:20:14
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-13 21:22:14
你提取出来的重组质粒大小很有可能会变化,因为质粒在菌中的形态是变化的,你可以做酶切验证,然后跑电泳验证,跑电泳的时候可以将你当时酶切质粒和酶切的基因也点上作为对照,这样如果条带正确那么重组质粒也是没有任何问题的!
当然了也可以用你提取出来的质粒作为模板进行PCR验证你的目的基因。

祝好运!
2楼2011-04-13 13:47:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-13 16:21:12
你是不是直接拿刚提取的质粒跑胶看大小了?
3楼2011-04-13 15:46:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-13 15:46:45:
你是不是直接拿刚提取的质粒跑胶看大小了?

刚提取的质粒跑胶是不是对胶上片段大小有影响啊?
4楼2011-04-13 16:21:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
xiaoyu1014126(金币+2): 2011-04-13 20:26:54
amisking(EPI+1): good! 2011-04-13 21:23:25
引用回帖:
Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-04-13 16:21:59:
刚提取的质粒跑胶是不是对胶上片段大小有影响啊?

拿刚提的质粒跑胶检测大小是不准确的。常用的DNA Marker只能标定线性DNA的大小,而提取的质粒有环状、开环、线性三种类型,所以跑胶时会开到三条带。好像现在有卖专门标定质粒的Marker了,不过我还没用过。因此要确定一个质粒的大小只有经过单酶切后再跑胶才可以。另外从不同细胞里提出的同一种质粒带型一般也是不同的
5楼2011-04-13 16:57:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

csdyg

木虫 (正式写手)


最终目的做表达的质粒最好测序
6楼2011-04-14 02:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoyu1014126 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料化工总分334求调剂 +12 Riot2025 2026-04-08 12/600 2026-04-09 16:48 by 1753564080
[考研] 一志愿郑州大学 22408 305分求调剂 +3 安小满zzz 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:16 by wp06
[考研] 288求调剂 +8 代fish 2026-04-09 8/400 2026-04-09 15:54 by zhuimr
[考研] 274求调剂 +5 山阿蔓 2026-04-07 5/250 2026-04-09 15:28 by 18828373951
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 0703化学调剂 348分 +14 唉我超真没招了 2026-04-06 15/750 2026-04-08 19:16 by 我减肥1
[考研] 一志愿南昌大学,085600,344分求调剂 +11 调剂上岸玘 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:17 by luoyongfeng
[考研] 化工学硕 285求调剂 +26 Wisjxn 2026-04-07 26/1300 2026-04-08 14:42 by screening
[考研] 调剂 +18 不逢春 2026-04-05 19/950 2026-04-07 22:04 by lijunpoly
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +12 zyx上岸! 2026-04-04 12/600 2026-04-07 02:09 by BruceLiu320
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-04 4/200 2026-04-05 09:44 by zhq0425
[考研] 考研调剂 +11 小sun要好运 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:02 by qlm5820
[考研] 材料与化工306分找调剂 +12 沧海轻舟e 2026-04-03 13/650 2026-04-04 23:45 by lqwchd
[考研] 344材料与化工调剂 +9 调剂上岸玘 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:10 by happyddm
[考研] 085400电子信息319求调剂(接受跨专业调剂) +5 星星不眨眼喽 2026-04-03 6/300 2026-04-04 21:50 by hemengdong
[考研] 本9一志愿2 0854低分专硕286求调剂 +9 芒种111 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:01 by tangruihua
[考研] 085501一志愿天工大,机械专硕求调剂,跨材料 +3 33上 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:08 by 1753564080
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 366求调剂 +7 sbdnd 2026-04-03 7/350 2026-04-03 12:40 by cymywx
信息提示
请填处理意见