应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊
61/1返回列表
查看: 2796  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊

表达载体构建好以后，转化进pET29a，从转化子中重新提取质粒，发现质粒大小部队了，打了大约600bp，但是酶切验证还是有我连上去的目的片段，太纠结了！！
有没有给解释下的啊~~~
郁闷中
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-13 11:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
★
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-13 16:20:14
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-13 21:22:14
你提取出来的重组质粒大小很有可能会变化，因为质粒在菌中的形态是变化的，你可以做酶切验证，然后跑电泳验证，跑电泳的时候可以将你当时酶切质粒和酶切的基因也点上作为对照，这样如果条带正确那么重组质粒也是没有任何问题的！
当然了也可以用你提取出来的质粒作为模板进行PCR验证你的目的基因。

祝好运！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-13 13:47:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-13 16:21:12
你是不是直接拿刚提取的质粒跑胶看大小了？
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-13 15:46:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-13 15:46:45:
你是不是直接拿刚提取的质粒跑胶看大小了？

刚提取的质粒跑胶是不是对胶上片段大小有影响啊？
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-13 16:21:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
xiaoyu1014126(金币+2): 2011-04-13 20:26:54
amisking(EPI+1): good！ 2011-04-13 21:23:25
引用回帖:
Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-04-13 16:21:59:
刚提取的质粒跑胶是不是对胶上片段大小有影响啊？

拿刚提的质粒跑胶检测大小是不准确的。常用的DNA Marker只能标定线性DNA的大小，而提取的质粒有环状、开环、线性三种类型，所以跑胶时会开到三条带。好像现在有卖专门标定质粒的Marker了，不过我还没用过。因此要确定一个质粒的大小只有经过单酶切后再跑胶才可以。另外从不同细胞里提出的同一种质粒带型一般也是不同的
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-04-13 16:57:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

csdyg

木虫 (正式写手)
最终目的做表达的质粒最好测序
赞一下 回复此楼
6楼2011-04-14 02:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoyu1014126 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭