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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 3434.5
帖子: 731
在线: 221.5小时
虫号: 483157

[交流] 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊

表达载体构建好以后，转化进pET29a，从转化子中重新提取质粒，发现质粒大小部队了，打了大约600bp，但是酶切验证还是有我连上去的目的片段，太纠结了！！
有没有给解释下的啊~~~
郁闷中

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1楼 2011-04-13 11:38:07

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空谷幽风

金虫 (正式写手)

xiaoyu1014126(金币+2): 2011-04-13 20:26:54
amisking(EPI+1): good！ 2011-04-13 21:23:25

引用回帖:

Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-04-13 16:21:59:
刚提取的质粒跑胶是不是对胶上片段大小有影响啊？

拿刚提的质粒跑胶检测大小是不准确的。常用的DNA Marker只能标定线性DNA的大小，而提取的质粒有环状、开环、线性三种类型，所以跑胶时会开到三条带。好像现在有卖专门标定质粒的Marker了，不过我还没用过。因此要确定一个质粒的大小只有经过单酶切后再跑胶才可以。另外从不同细胞里提出的同一种质粒带型一般也是不同的