[交流] 【求助/交流】质粒提取

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1楼 2011-03-11 10:44:20

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ben1147

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★
tangchaoxi(金币+1):谢谢参与

看具体多大了
震荡太厉害有可能把菌基因组弄断了也提出来

2楼2011-03-11 10:46:24

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wqj1988926

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★
tangchaoxi(金币+1):谢谢参与

肯定是提取过程中出现了问题，建议重新提取，污染杂菌等问题

3楼2011-03-11 11:14:52

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tangchaoxi

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引用回帖:

Originally posted by wqj1988926 at 2011-03-11 11:14:52:
肯定是提取过程中出现了问题，建议重新提取，污染杂菌等问题

加了抗生素的，应该不会污染吧。就算污染了杂菌，怎么也正好有质粒呢

4楼2011-03-11 17:50:42

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tangchaoxi

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引用回帖:

Originally posted by ben1147 at 2011-03-11 10:46:24:
看具体多大了
震荡太厉害有可能把菌基因组弄断了也提出来

那提取出来的就不能用了吧

5楼2011-03-11 17:51:53

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郝钊

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tangchaoxi(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-16 09:43:20

提取的大小有多少呢？四条带的位置如何？最好把电泳图晒出来看看。我之前提取出来的质粒不止四条，酶切后就对了，奇怪。下一步能不能做，要看你具体做什么。pcr的话没问题，直接P就可以；要做酶切连接的话，切胶回收你的片段也没太大问题；转化之类的操作就不可以了。

6楼2011-03-11 20:16:59

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翱宇

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★
tangchaoxi(金币+1):谢谢参与

应该放置个图片来，另外建议楼主说明下，怎么提的质粒，是用柱子呢，还是碱法，怎么处理的等。

7楼2011-03-11 20:18:50

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weishengsu5

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Originally posted by tangchaoxi at 2011-03-11 10:44:20:
提质粒出现四条带是什么情况？各位帮帮忙

很可能就是染色体断裂

8楼2011-03-11 20:58:05

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yabing0324

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rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-21 22:50:14

我的好多条带呢，操作也很轻柔了，后来单酶切，出现两条带，空载体和目的片段，这就好了，P也能P出条带，做定量也蛮好的，加油往下做吧，呵呵

9楼2011-03-12 22:03:50

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zhangxn2010

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rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-21 22:50:30

原因肯定很多，注意碱裂解时间不能太长，否则对质粒质量影响很大

10楼2011-03-12 22:52:02

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cxl_yll

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有三条带是正常的吧？

11楼2011-03-13 11:23:19

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wanghuiyanyx

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lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-03-16 09:43:39

这个原因很多方面，质粒本身大小，在细胞内的PCN，还有就是操作过程是否剧烈。总的来说，如果后续步骤对质粒质量要求不是那么严格，一般没问题。楼主要是不放心，就做个酶切看看。

12楼2011-03-13 11:35:54

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tangchaoxi

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引用回帖:

Originally posted by wanghuiyanyx at 2011-03-13 11:35:54:
这个原因很多方面，质粒本身大小，在细胞内的PCN，还有就是操作过程是否剧烈。总的来说，如果后续步骤对质粒质量要求不是那么严格，一般没问题。楼主要是不放心，就做个酶切看看。

好的，谢谢呵呵！

13楼2011-03-16 09:22:11

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-超越beyond

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把图晒出来吧

14楼2011-03-20 17:36:36

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mengjiezy114

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楼主应该晒下图的，说一下大小。我提的一般都有两条带，听老师说提的质粒有很多形态，有时会多个条带是很正常的。

15楼2011-03-21 21:34:15

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ls2046

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scelab(金币+2): 热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2011-03-21 23:29:27

不同的质粒在没有经过酶切或其它方式处理的情况下，由于自身拓扑结构的差异出现一至四条带均为正常，质粒干净没有杂质不影响继续使用，，，

16楼2011-03-21 22:08:10

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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

建议楼主上图分析！

17楼2011-03-21 22:44:00

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tangchaoxi

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问题已经解决了，谢谢各位！

18楼2011-03-22 08:47:04

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mengna9981

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有断裂的吧或者是基因组

19楼2011-03-22 09:19:06

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yyw30000

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提出基因组了，下次操作时动作小一点

20楼2011-03-23 17:33:47

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hyy2005bne

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★
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我也曾经跑出来过4条带，师姐说她们称为鬼带。没什么影响，可以继续做做试试看

21楼2011-04-01 17:01:35

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jingcao3081

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我觉得可能污染了！可以再试试！