| 查看: 3629 | 回复: 4 | ||
xiaoyu1014126木虫 (正式写手)
|
[求助]
重组的质粒提取出来线性总是比超螺旋的多很多呢？
|
| 3kb和1kb 的片段分别与pET29酶连后，转进TOP10，提取出来（同时操作），1kb的质粒很正常，可是为什么3kb的质粒提取出来后线性总是比超螺旋的多很多呢？超螺旋的只有一点点痕迹。提取出来的质粒再转进BL21中，再从BL21中提取，任然发生相同的情况，同样是1kb的重组质粒正常，而3kb的质粒线性总是比超螺旋的多很多啊~~纠结？ |
回复此楼» 猜你喜欢
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有258人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 新手求助——质粒电泳条带问题
已经有15人回复
- pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
已经有12人回复
- 求助：关于重组质粒目的条带丢失
已经有9人回复
- 请教重组质粒快检的具体方法以及原理。。。。
已经有15人回复
- 在基因重组过程中，怎样鉴别质粒载体是否被限制性内切酶切好？
已经有10人回复
- 【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下
已经有4人回复
- 【求助/交流】质粒提取线性化的很多
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～
已经有16人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
- 【求助/交流】对于BL21，含有那种形态的重组质粒多则诱导表达量高呢？超螺旋？线性？�
已经有7人回复
- 【问题反馈】一对引物扩出来的产物测序后竟然是很多质粒的PCR产物，再怎么区分呢？
已经有10人回复
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
不解，帮顶 2楼2011-07-15 23:28:00
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 鼓励 2011-07-16 18:11:00
xiaoyu1014126(金币+4): 2011-07-16 22:41:50
dhd997(金币+5): 鼓励 2011-07-16 18:11:00
xiaoyu1014126(金币+4): 2011-07-16 22:41:50
| 电泳进行鉴定质粒DNA时，多数情况下你能看到三条带，不要认为是超螺旋、线性和开环这三条带，质粒样品中是不含线性DNA的，单酶切后线性化质粒后再电泳，就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。其实这三条带以电泳速度的快慢而排序，分别是超螺旋、开环和复制中间体。有时会出现两条带，甚至一条(一般是超螺旋的质粒)，这跟上样量也有些关系。出现不同的结果都是由抽提质粒时的操作手法造成的。如果严格按照操作步骤，超螺旋的质粒会较多。酶切后线性化条带电泳时所处的位置就指示质粒的大小。 |
3楼2011-07-16 15:07:29
xiaoyu1014126
木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2747.4
- 散金: 3353
- 红花: 9
- 帖子: 753
- 在线: 227.8小时
- 虫号: 483157
- 注册: 2007-12-26
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2012-02-20 16:20:18
5楼2012-06-05 16:41:21
