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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组的质粒提取出来线性总是比超螺旋的多很多呢？
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[求助] 重组的质粒提取出来线性总是比超螺旋的多很多呢？

3kb和1kb 的片段分别与pET29酶连后，转进TOP10，提取出来（同时操作），1kb的质粒很正常，可是为什么3kb的质粒提取出来后线性总是比超螺旋的多很多呢？超螺旋的只有一点点痕迹。提取出来的质粒再转进BL21中，再从BL21中提取，任然发生相同的情况，同样是1kb的重组质粒正常，而3kb的质粒线性总是比超螺旋的多很多啊~~纠结？
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1楼 2011-07-15 19:24:38
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cxj.nt

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 鼓励 2011-07-16 18:11:00
xiaoyu1014126(金币+4): 2011-07-16 22:41:50
电泳进行鉴定质粒DNA时，多数情况下你能看到三条带，不要认为是超螺旋、线性和开环这三条带，质粒样品中是不含线性DNA的，单酶切后线性化质粒后再电泳，就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。其实这三条带以电泳速度的快慢而排序，分别是超螺旋、开环和复制中间体。有时会出现两条带，甚至一条(一般是超螺旋的质粒)，这跟上样量也有些关系。出现不同的结果都是由抽提质粒时的操作手法造成的。如果严格按照操作步骤，超螺旋的质粒会较多。酶切后线性化条带电泳时所处的位置就指示质粒的大小。
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3楼2011-07-16 15:07:29
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
不解，帮顶
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2楼2011-07-15 23:28:00
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-07-15 19:24:38:
3kb和1kb 的片段分别与pET29酶连后，转进TOP10，提取出来（同时操作），1kb的质粒很正常，可是为什么3kb的质粒提取出来后线性总是比超螺旋的多很多呢？超螺旋的只有一点点痕迹。提取出来的质粒再转进BL21中，再从 ...

呵呵~~
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4楼2012-02-20 16:20:18
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