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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】质粒提取

提质粒出现四条带是什么情况?各位帮帮忙
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ben1147

木虫 (正式写手)



tangchaoxi(金币+1):谢谢参与
看具体多大了
震荡太厉害有可能把菌基因组弄断了也提出来
2楼2011-03-11 10:46:24
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wqj1988926

金虫 (正式写手)



tangchaoxi(金币+1):谢谢参与
肯定是提取过程中出现了问题,建议重新提取,污染杂菌等问题
3楼2011-03-11 11:14:52
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by wqj1988926 at 2011-03-11 11:14:52:
肯定是提取过程中出现了问题,建议重新提取,污染杂菌等问题

加了抗生素的,应该不会污染吧。就算污染了杂菌,怎么也正好有质粒呢
4楼2011-03-11 17:50:42
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2011-03-11 10:46:24:
看具体多大了
震荡太厉害有可能把菌基因组弄断了也提出来

那提取出来的就不能用了吧
5楼2011-03-11 17:51:53
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郝钊

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
tangchaoxi(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-16 09:43:20
提取的大小有多少呢?四条带的位置如何?最好把电泳图晒出来看看。我之前提取出来的质粒不止四条,酶切后就对了,奇怪。下一步能不能做,要看你具体做什么。pcr的话没问题,直接P就可以;要做酶切连接的话,切胶回收你的片段也没太大问题;转化之类的操作就不可以了。
6楼2011-03-11 20:16:59
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翱宇

禁虫 (正式写手)



tangchaoxi(金币+1):谢谢参与
应该放置个图片来,另外建议楼主说明下,怎么提的质粒,是用柱子呢,还是碱法,怎么处理的等。
7楼2011-03-11 20:18:50
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weishengsu5

木虫 (正式写手)



tangchaoxi(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by tangchaoxi at 2011-03-11 10:44:20:
提质粒出现四条带是什么情况?各位帮帮忙

很可能就是染色体断裂
8楼2011-03-11 20:58:05
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yabing0324

金虫 (职业作家)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-21 22:50:14
我的好多条带呢,操作也很轻柔了,后来单酶切,出现两条带,空载体和目的片段,这就好了,P也能P出条带,做定量也蛮好的,加油往下做吧,呵呵
9楼2011-03-12 22:03:50
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-21 22:50:30
原因肯定很多,注意碱裂解时间不能太长,否则对质粒质量影响很大
10楼2011-03-12 22:52:02
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cxl_yll

木虫 (正式写手)


有三条带是正常的吧?
11楼2011-03-13 11:23:19
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-03-16 09:43:39
这个原因很多方面,质粒本身大小,在细胞内的PCN,还有就是操作过程是否剧烈。总的来说,如果后续步骤对质粒质量要求不是那么严格,一般没问题。楼主要是不放心,就做个酶切看看。
12楼2011-03-13 11:35:54
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by wanghuiyanyx at 2011-03-13 11:35:54:
这个原因很多方面,质粒本身大小,在细胞内的PCN,还有就是操作过程是否剧烈。总的来说,如果后续步骤对质粒质量要求不是那么严格,一般没问题。楼主要是不放心,就做个酶切看看。

好的,谢谢呵呵!
13楼2011-03-16 09:22:11
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)


把图晒出来吧
14楼2011-03-20 17:36:36
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mengjiezy114

新虫 (初入文坛)


楼主应该晒下图的,说一下大小。我提的一般都有两条带,听老师说提的质粒有很多形态,有时会多个条带是很正常的。
15楼2011-03-21 21:34:15
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★
scelab(金币+2): 热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2011-03-21 23:29:27
不同的质粒在没有经过酶切或其它方式处理的情况下,由于自身拓扑结构的差异出现一至四条带均为正常,质粒干净没有杂质不影响继续使用,,,
16楼2011-03-21 22:08:10
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建议楼主上图分析!
17楼2011-03-21 22:44:00
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


问题已经解决了,谢谢各位!
18楼2011-03-22 08:47:04
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mengna9981

铜虫 (小有名气)



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有断裂的吧 或者是基因组
19楼2011-03-22 09:19:06
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yyw30000

铜虫 (小有名气)


提出基因组了,下次操作时动作小一点
20楼2011-03-23 17:33:47
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hyy2005bne

新虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也曾经跑出来过4条带,师姐说她们称为鬼带。没什么影响,可以继续做做试试看
21楼2011-04-01 17:01:35
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jingcao3081

铁杆木虫 (职业作家)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得可能污染了!可以再试试!
22楼2011-04-01 17:06:21
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