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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提取的杂质去除问题
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小心点

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒提取的杂质去除问题

最近买过来的普通3.0k质粒，在大肠杆菌Top10里存着，提取的时候，菌体用TE洗过了，用酚氯仿也抽提了两次，在界面明显已经没有蛋白杂质了，但是最后乙醇沉淀的时候，还是出现了大量的白色絮状杂质，这个到底是怎么回事啊？
怎么能把杂质去除干净呢？
大侠们帮忙啊
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1楼 2010-09-29 22:56:17
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602059625

金虫 (知名作家)
用试剂盒
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[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
2楼2010-09-30 09:50:07
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小-丑鱼

捐助贵宾 (正式写手)

对我而言可爱的她
silicare:应该是 去上清吧 2010-10-08 12:12:28
白色絮状沉淀是正常现象，然后离心，取上清
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放不下的，除了手中的金箍棒，还有你的手。
3楼2010-09-30 09:56:59
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aga0110125

银虫 (小有名气)
★
scelab(金币+1):谢谢交流！:tiger06: 2010-10-01 23:46:35
看清楚再说话啊，加了乙醇还取上清 ，找死啊！
蛋白质要么酚氯仿多抽提几次，混匀的时候振荡时间长一点
要么就用硅胶柱提
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4楼2010-09-30 11:29:56
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小心点

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 602059625 at 2010-09-30 09:50:07:
用试剂盒

100ml菌液大量提质粒，试剂盒明显不给力啊
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5楼2010-09-30 21:46:43
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小心点

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by aga0110125 at 2010-09-30 11:29:56:
看清楚再说话啊，加了乙醇还取上清 ，找死啊！
蛋白质要么酚氯仿多抽提几次，混匀的时候振荡时间长一点
要么就用硅胶柱提

抽第二遍都看不到杂蛋白了啊，很是郁闷。酚氯仿处理时间长了，质粒不就都断裂了么。
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6楼2010-09-30 21:48:32
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小心点

金虫 (正式写手)
有没有大侠啊，帮帮忙咧~~
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7楼2010-10-01 21:16:14
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
有的试剂盒里有除蛋白的试剂，很好用。比如威格拉斯的。
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8楼2010-10-02 16:47:03
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fly2000

新虫 (初入文坛)
小心点(金币+2):谢谢~ 2010-10-03 16:59:25
有卖质粒大量提取试剂盒的，或者委托宝生物公司提取；
不过正常情况下，当质粒量很大的情况，乙醇沉淀时，也会有白色絮状DNA析出，你电泳检测过了吗？OD测定了没有？即使残存少量蛋白，有可能对你下步实验的影响也不大！
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9楼2010-10-02 22:43:56
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
★
silicare(金币+1):谢谢指正，TA的意思应该是 去 上清 吧 2010-10-08 12:12:12
引用回帖:
Originally posted by 小-丑鱼 at 2010-09-30 09:56:59:
白色絮状沉淀是正常现象，然后离心，取上清

不会吧……都乙醇沉淀了，还取上清……那不是什么也没有啦……
赞一下(1人) 回复此楼
我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
10楼2010-10-03 09:29:38
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