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hotmail

木虫 (小有名气)

银虫

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全血DNA提取中用到的TE Buffer 能否用无菌注射用水代替？
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西瓜 hotmail

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银虫
1楼2011-07-02 21:40:36
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gwbk

木虫 (正式写手)
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1949stone(金币+3): 真是很激烈了 啊支持u 2011-07-03 18:37:48
哈哈，欢迎踢馆同时也学习了~~~~~~~

2010版的药典也翻过了，还是资料查的不够多。
加生理盐水、葡萄糖所指的是点滴瓶装水，所指的并不是注射用水，属于我个人的概念混淆。
哇哈哈做液相比超纯水差不多，可以说物美价廉。

药典版本变化虽然不大，但是规定还是挺硬性的。注射用水就是纯化水蒸馏所得，纯化水没有硬性规定纯化方式，就是说，无论是超纯水还是超超超纯水，要成为注射用水，必须经过蒸馏~~~

中国药典2010版  附录ⅩⅥ 制药用水

水是药物生产中用量大、使用广的一种辅料，用于生产过程及药物制剂的制备。

本版药典中所收载的制药用水，因其使用的范围不同而分为饮用水、纯化水、注射用水及灭菌注射用水。一般应根据各生产工序或使用目的与要求选用适宜的制药用水。药品生产企业应确保制药用水的质量符合预期用途的要求。

制药用水的原水通常为饮用水。

制药用水的制备从系统设计、材质选择、制备过程、贮存、分配和使用均应符合药品生产质量管理规范的要求。制水系统应经过验证，并建立日常监控、检测和报告制度，有完善的原始记录备查制药用水系统应定期进行清洗与消毒，消毒可以采用热处理或化学处理等方法。采用的消毒方法以及化学处理后消毒剂的去除应经过验证。

饮用水 为天然水经净化处理所得的水，其质量必须符合现行中华人民共和国国家标准《生活饮用水卫生标准》

饮用水可作为药材净制时的漂洗、制药用具的粗洗用水。除另有规定外，
也可作为药材的提取溶剂。

纯化水 为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制备的制药用水。不含任何附加剂，其质量应符合二部纯化水项下的规定。

纯化水可作为配制普通药物制剂用的溶剂或试验用水；可作为中药注射剂、滴眼剂等灭菌制剂所用药材的提取溶剂；口服、外用制剂配制用溶剂或稀释剂；非灭菌制剂用器具的精洗用水。也用作非灭菌制剂所用药材的提取溶剂。纯化水不得用于注射剂的配制与稀释。

纯化水有多种制备方法，应严格监测各生产环节，防止微生物污染，确保使用点的水质。

注射用水 为纯化水经蒸馏所得的水，应符合细菌内毒素试验要求。注射用水必须在防止细菌内毒素产生的设计条件下生产、贮藏及分装。其质量应符合注射用水项下的规定。

注射用水可作为配制注射剂、滴眼剂等的溶剂或稀释剂及容器的精洗。为保证注射用水的质量，应减少原水中的细菌内毒素，监控蒸馏法制备注射用水的各生产环节，并防止微生物的污染。应定期清洗与消毒注射用水系统。注射用水的储存方式和静态储存期限应经过验证确保水质符合质量要求，例如可以在80℃以上保温或70℃以上保温循环或4℃以下的状态下存放。

灭菌注射用水 为注射用水按照注射剂生产工艺制备所得。不含任何添加剂。主要用于注射用灭菌粉末的溶剂或注射剂的稀释剂。其质量符合灭菌注射用水项下的规定。

灭菌注射用水灌装规格应适应临床需要，避免大规格、多次使用造成的污染。


附药典2010版1484页pdf说明
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6楼2011-07-03 17:02:14
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西瓜

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楼上两位大神已经证明，无菌注射用水能保证纯度和无菌，我就说下TE buffer吧。

TE buffer的成分就是Tris和EDTA。Tris是一种常用的pH缓冲液；EDTA可以螯合阳离子，如二价镁离子，而镁离子是很多酶活性所必需的（如DNA酶），所以EDTA可以抑制DNA酶的活性。


我不知道全血DNA提取的具体步骤如何，所以能不能用无菌水代替，还要看TE在里面起什么作用。
TE无非就是提供一个特定的pH环境（可用HCl调节pH），以及抑制核酸酶的活性。如果用来悬浮样品，或者最后提完后溶解DNA，那完全可以用无菌水代替。就像见裂解法提质粒时的溶液1，成分是葡萄糖+tris+EDTA，作用无非就是把菌体悬浮起来，完全可以用水代替。提完质粒后，最后加TE溶解DNA，这一步也可以用水代替，不过TE的弱碱性环境更适于DNA的长期保存。

当然，如果需要特殊的pH，或者实验要求很严格，那就不能用水代替了。
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gwbk
12楼2011-07-03 19:19:44
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西瓜

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Originally posted by hotmail at 2011-07-03 19:27:05:
在全血DNA提取实验中，TE buffer 主要用于在标本量较大时，红细胞裂解后,洗涤悬浮沉淀之用。从西瓜分析看，应该可用水代替。

那还是用TE吧。红细胞裂解后，DNA和内源性核酸酶都释放出来了，不抑制DNA酶活性的话，你要的DNA就要被降解了。这跟提质粒不同，加溶液I时，细菌都还没被裂解，活得好好的，内源性DNA酶跟质粒DNA还是井水不犯河水的。你把细胞一裂解，DNA酶就可以直接接触DNA了，所以需要TE的EDTA来抑制DNA酶活性。
如果没有加其他DNA酶抑制剂，那建议你还是用TE，不要用水。
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14楼2011-07-03 19:35:19
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gwbk

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1949stone(金币+1): 似的 哇哈哈 2011-07-02 22:33:37
不可以，注射用水虽然是无菌的，但是一般都是葡萄糖溶液或者生理盐水，对保存或者是后续试验有不可知的影响。。。可以用哇哈哈瓶装纯净水灭菌代替，哇哈哈。
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2楼2011-07-02 21:52:36
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cdl007

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dhd997(金币+2): 鼓励 2011-07-03 10:17:00
当然可以用注射用水了，注射用水都是蒸馏水好不好。。。。就是小玻璃瓶的，护士用镊子一敲就开的，
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3楼2011-07-02 22:39:39
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gwbk

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dhd997(金币+3): good 2011-07-03 10:17:16
护士一敲就开的是安瓿管，一般安瓿管都是装安瓿水针剂的。很多，比如庆大霉素针剂、青霉素针剂。

中国药典2010版没有规定灭菌注射用水的性质，不管是离子交换、反渗透、双蒸水，符合如下标准即可：
【检查】 pH值 取本品100ml，加饱和氯化钾溶液0.3ml，依法测定（附录Ⅵ H），pH值应为5.0～7.0。
氨 取本品50ml，加碱性碘化汞钾溶液2ml，放置15分钟，如显色，与标准氯化铵溶液(取氯化铵31.5mg，加无氨水适量使溶解并稀释至1000ml)1.0ml，加无氨水48ml与碱性碘化汞钾溶液2ml制成的对照液比较，不得更深(0.000 02%)。
重金属 照纯化水项下的方法检查，应符合规定。　
[增订]
【检查】电导率 应符合规定（附录）。
总有机碳、铝盐 照纯化水项下的方法检查，应符合规定。

都是一些常规的检测，纯度未必好。
而注射用水，一般会标注，XXX用水，原因不说了。如果未标，则应符合药典规定。

建议：不推荐使用注射用水。
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4楼2011-07-03 00:39:05
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cdl007

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1949stone(金币+3): 围观 2011-07-03 18:37:15
呦，来踢馆了，
hoho

注射用水指符合中国药典注射用水项下规定的水。注射用水为蒸馏水或去离子经蒸馏所得的水，故又称重蒸馏水。

纯化水与注射用水二者的区别还在于制水工艺，纯化水的制备工艺可以有各种选择，但各国药典对注射用水的制备工艺均有限定条件，如美国药典明确规定注射用水的制备工艺只能是蒸馏及反渗透，中国药典则规定注射用水的生产工艺必须是蒸馏。

纯化水系统可采用反渗透，而注射用水系统则更多地使用蒸馏法，蒸馏水机往往是纯化水系统分配循环回路（用水回路）中的主要用水点。从制药用水源水的选择上，美国药典有较大的灵活性，按其规定，注射用水可以由饮用水经蒸馏或反渗透制得，

灭菌注射用水
【标准来源】

【药品名称】
通用名：灭菌注射用水曾用名：商品名：英文名：SterileWaterforInjection汉语拼音：MiejunZhusheyongShui本品成份为：注射用水。分子式：H2O分子量：18.02

注射用水是指不含热原，专供注射的重蒸馏水和高纯水。注射用水与纯化水的区别就在于无热原。注射用水再经灭菌得灭菌注射用水，作为粉针的溶剂或注射剂的稀释剂。

　　注射用水的质量要求

　　注射用水的质量要求较为严格，除一般蒸馏水的检查应符合药典规定外，还必须通过热原试验，尤其在制备静脉注射剂时注射用水的质量要求更应严格控制。《中国药典》（2000年版）规定：每ml中内毒素含量不得超过0.5EU，pH要求5.0-7.0，氨含量不超过0.00002%.


从制备工艺上看，是H2O，从分子式上看，也是H2O，注射用水绝对不会是葡萄糖溶液或生理盐水。
超纯水，纯水的对离子，即无机杂质的去除较充分，因此有很高的阻抗，超纯水阻抗较纯水更高，而注射用水，相同情况下还要强调对生物杂质，有机杂质的去除，通过反渗透法，EDI法，而且为除去反渗透无法除去的内毒素，还要有蒸馏工序。

注射用水用到普通的分子实验，PCR，核酸提取啥的，问题不大，当然能用更好的纯水自然更好，普通的实验，临时替代一下，问题真的不大
而高效液相等精密仪器使用的一定是超纯水，离子啊，有机杂质啊，要求会更高

[ Last edited by cdl007 on 2011-7-3 at 11:31 ]
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西瓜
5楼2011-07-03 11:14:03
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gwbk

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1949stone(金币+3): 有图有真相 2011-07-03 18:38:09
灭菌注射用水~~~
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西瓜
7楼2011-07-03 17:23:19
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西瓜

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我是来看牛人互掐的

[ Last edited by 西瓜 on 2011-7-3 at 19:20 ]
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8楼2011-07-03 18:51:34
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Originally posted by cdl007 at 2011-07-03 11:14:03:
呦，来踢馆了，
hoho

注射用水指符合中国药典注射用水项下规定的水。注射用水为蒸馏水或去离子经蒸馏所得的水，故又称重蒸馏水。

纯化水与注射用水二者的区别还在于制水工艺，纯化水的制备工艺可以有各种选 ...

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9楼2011-07-03 18:52:21
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Originally posted by gwbk at 2011-07-03 17:23:19:
灭菌注射用水~~~







[eimg]3f/7a/1320681_1309684904_ ...

哈哈，真带劲，学习了！
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10楼2011-07-03 18:53:06
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