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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 全血DNA提取中用到的TE Buffer 能否用无菌注射用水代替？
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木虫 (小有名气)

银虫

[交流] 全血DNA提取中用到的TE Buffer 能否用无菌注射用水代替？ 已有4人参与

全血DNA提取中用到的TE Buffer 能否用无菌注射用水代替？
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西瓜 hotmail

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银虫
1楼 2011-07-02 21:40:36
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西瓜

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我是来看牛人互掐的

[ Last edited by 西瓜 on 2011-7-3 at 19:20 ]
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8楼2011-07-03 18:51:34
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西瓜

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引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-07-03 11:14:03:
呦，来踢馆了，
hoho

注射用水指符合中国药典注射用水项下规定的水。注射用水为蒸馏水或去离子经蒸馏所得的水，故又称重蒸馏水。

纯化水与注射用水二者的区别还在于制水工艺，纯化水的制备工艺可以有各种选 ...

来围观
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9楼2011-07-03 18:52:21
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西瓜

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引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-07-03 17:23:19:
灭菌注射用水~~~







[eimg]3f/7a/1320681_1309684904_ ...

哈哈，真带劲，学习了！
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10楼2011-07-03 18:53:06
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西瓜

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楼上两位大神已经证明，无菌注射用水能保证纯度和无菌，我就说下TE buffer吧。

TE buffer的成分就是Tris和EDTA。Tris是一种常用的pH缓冲液；EDTA可以螯合阳离子，如二价镁离子，而镁离子是很多酶活性所必需的（如DNA酶），所以EDTA可以抑制DNA酶的活性。


我不知道全血DNA提取的具体步骤如何，所以能不能用无菌水代替，还要看TE在里面起什么作用。
TE无非就是提供一个特定的pH环境（可用HCl调节pH），以及抑制核酸酶的活性。如果用来悬浮样品，或者最后提完后溶解DNA，那完全可以用无菌水代替。就像见裂解法提质粒时的溶液1，成分是葡萄糖+tris+EDTA，作用无非就是把菌体悬浮起来，完全可以用水代替。提完质粒后，最后加TE溶解DNA，这一步也可以用水代替，不过TE的弱碱性环境更适于DNA的长期保存。

当然，如果需要特殊的pH，或者实验要求很严格，那就不能用水代替了。
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gwbk
12楼2011-07-03 19:19:44
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西瓜

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引用回帖:
Originally posted by hotmail at 2011-07-03 19:27:05:
在全血DNA提取实验中，TE buffer 主要用于在标本量较大时，红细胞裂解后,洗涤悬浮沉淀之用。从西瓜分析看，应该可用水代替。

那还是用TE吧。红细胞裂解后，DNA和内源性核酸酶都释放出来了，不抑制DNA酶活性的话，你要的DNA就要被降解了。这跟提质粒不同，加溶液I时，细菌都还没被裂解，活得好好的，内源性DNA酶跟质粒DNA还是井水不犯河水的。你把细胞一裂解，DNA酶就可以直接接触DNA了，所以需要TE的EDTA来抑制DNA酶活性。
如果没有加其他DNA酶抑制剂，那建议你还是用TE，不要用水。
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14楼2011-07-03 19:35:19
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