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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 全血DNA提取中用到的TE Buffer 能否用无菌注射用水代替？
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木虫 (小有名气)

银虫
送鲜花一朵
谢谢讨论。在讨论中学习与成长。
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银虫
11楼2011-07-03 19:19:39
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
楼上两位大神已经证明，无菌注射用水能保证纯度和无菌，我就说下TE buffer吧。

TE buffer的成分就是Tris和EDTA。Tris是一种常用的pH缓冲液；EDTA可以螯合阳离子，如二价镁离子，而镁离子是很多酶活性所必需的（如DNA酶），所以EDTA可以抑制DNA酶的活性。


我不知道全血DNA提取的具体步骤如何，所以能不能用无菌水代替，还要看TE在里面起什么作用。
TE无非就是提供一个特定的pH环境（可用HCl调节pH），以及抑制核酸酶的活性。如果用来悬浮样品，或者最后提完后溶解DNA，那完全可以用无菌水代替。就像见裂解法提质粒时的溶液1，成分是葡萄糖+tris+EDTA，作用无非就是把菌体悬浮起来，完全可以用水代替。提完质粒后，最后加TE溶解DNA，这一步也可以用水代替，不过TE的弱碱性环境更适于DNA的长期保存。

当然，如果需要特殊的pH，或者实验要求很严格，那就不能用水代替了。
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gwbk
12楼2011-07-03 19:19:44
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木虫 (小有名气)

银虫
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-03 19:19:44:
楼上两位大神已经证明，无菌注射用水能保证纯度和无菌，我就说下TE buffer吧。

TE buffer的成分就是Tris和EDTA。Tris是一种常用的pH缓冲液；EDTA可以螯合阳离子，如二价镁离子，而镁离子是很多酶活性所必需的（ ...

在全血DNA提取实验中，TE buffer 主要用于在标本量较大时，红细胞裂解后,洗涤悬浮沉淀之用。从西瓜分析看，应该可用水代替。
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银虫
13楼2011-07-03 19:27:05
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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Originally posted by hotmail at 2011-07-03 19:27:05:
在全血DNA提取实验中，TE buffer 主要用于在标本量较大时，红细胞裂解后,洗涤悬浮沉淀之用。从西瓜分析看，应该可用水代替。

那还是用TE吧。红细胞裂解后，DNA和内源性核酸酶都释放出来了，不抑制DNA酶活性的话，你要的DNA就要被降解了。这跟提质粒不同，加溶液I时，细菌都还没被裂解，活得好好的，内源性DNA酶跟质粒DNA还是井水不犯河水的。你把细胞一裂解，DNA酶就可以直接接触DNA了，所以需要TE的EDTA来抑制DNA酶活性。
如果没有加其他DNA酶抑制剂，那建议你还是用TE，不要用水。
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14楼2011-07-03 19:35:19
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gwbk

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-03 19:19:44:
楼上两位大神已经证明，无菌注射用水能保证纯度和无菌，我就说下TE buffer吧。

TE buffer的成分就是Tris和EDTA。Tris是一种常用的pH缓冲液；EDTA可以螯合阳离子，如二价镁离子，而镁离子是很多酶活性所必需的（ ...

总结帖~~~~
可以照做了。
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15楼2011-07-03 20:07:20
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gwbk

木虫 (正式写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 严重同意！做科研就要有较真的精神，呵呵～ 2011-07-03 20:21:26
不讨论，无真知
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16楼2011-07-03 20:13:15
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黎明前的明

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果是近期用DNA，可以用的
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17楼2012-04-19 22:09:50
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