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biolinshen银虫 (初入文坛)
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【求助/交流】请教：DNA浓度测定 已有4人参与
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手头有酶切后切胶纯化（OMEGA）样品两份， 用于qPCR定量。 所以要求对纯化后样品精确定量。100倍稀释后，测定浓度。 手头两台DNA浓度分光光度计，一台Eppendorf 的，一台岛津的。 对两份样品测定得出的浓度差异很大（35， 0） vs (100, 45) 最主要问题还在于A 样本跑胶条带亮度远小于B样品。另外A260 /A 280 远小于 1.8. 我的问题 1. 有什么办法可以更好去除DNA样品中 蛋白等杂质呢？ 我提取的质粒DNA, 酶切后进行胶纯化， 难道还不能保证DNA的纯度？ 2. 紫外分光光度计，对DNA浓度的测定准确度如何？ 问了不少人，似乎对其精度都表示怀疑。 对各位的建议，谢过先！ |
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2楼2010-09-11 20:34:56
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比值小于1.8说明你的DNA样品含有蛋白质，含有蛋白质的话，测算DNA肯定不准，而且会影响到PCR，要保证大于或是等于1.8，不能差距太大。 提取DNA的时候，离心速度要大小适宜，才能去除蛋白质或是最大限度减少蛋白质。 一般细菌用 12000r/min. 1.5mL 的离心管。 用紫外测DNA久必须要用石英比色皿或是比石英更好的，对照和溶解DNA的溶液要超纯。 |
6楼2010-09-12 20:00:51
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