应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教：DNA浓度测定
91/1返回列表
查看: 2010  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

biolinshen

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教：DNA浓度测定 已有4人参与

手头有酶切后切胶纯化（OMEGA）样品两份， 用于qPCR定量。 所以要求对纯化后样品精确定量。100倍稀释后，测定浓度。 手头两台DNA浓度分光光度计，一台Eppendorf 的，一台岛津的。   对两份样品测定得出的浓度差异很大（35， 0）  vs (100, 45) 最主要问题还在于A 样本跑胶条带亮度远小于B样品。另外A260 /A 280 远小于 1.8. 我的问题

1. 有什么办法可以更好去除DNA样品中 蛋白等杂质呢？ 我提取的质粒DNA, 酶切后进行胶纯化， 难道还不能保证DNA的纯度？

2.  紫外分光光度计，对DNA浓度的测定准确度如何？  问了不少人，似乎对其精度都表示怀疑。

对各位的建议，谢过先！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-11 19:41:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
不知道 顶一下 希望有人能够帮助
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
2楼2010-09-11 20:34:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

girlfisher

金虫 (小有名气)
biolinshen(金币+3):感谢您的建议 2010-09-11 21:33:15
biolinshen(金币+2): 2010-09-12 19:49:07
切胶纯化然后又稀释100倍，这种情况一般你的DNA含量低于1ng/uL，用分光光度计已经完全不准了。
至少也要用原始样品在低样品消耗的nanodrop上测含量，不过还是建议用内参来定量或者用更加准确的Qubit方法确定模板含量。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-09-11 20:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdqzsdqz

木虫 (著名写手)
同意三楼
回复此楼
4楼2010-09-11 23:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biolinshen

银虫 (初入文坛)
感谢这位， 你的回答给我很大的帮助。
引用回帖:
Originally posted by girlfisher at 2010-09-11 20:54:08:
切胶纯化然后又稀释100倍，这种情况一般你的DNA含量低于1ng/uL，用分光光度计已经完全不准了。
至少也要用原始样品在低样品消耗的nanodrop上测含量，不过还是建议用内参来定量或者用更加准确的Qubit方法确定模板 ...

赞一下 回复此楼
5楼2010-09-12 19:50:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

priorpost06

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:23:33
比值小于1.8说明你的DNA样品含有蛋白质，含有蛋白质的话，测算DNA肯定不准，而且会影响到PCR，要保证大于或是等于1.8，不能差距太大。
提取DNA的时候，离心速度要大小适宜，才能去除蛋白质或是最大限度减少蛋白质。
一般细菌用 12000r/min.  1.5mL 的离心管。
用紫外测DNA久必须要用石英比色皿或是比石英更好的，对照和溶解DNA的溶液要超纯。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-09-12 20:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongfangzz

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
好像用氯仿或是异丙醇就可以分离核酸和蛋白质吧
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-09-12 20:16:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

非池中物

过来学习一下
回复此楼
8楼2010-09-12 20:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biolinshen

银虫 (初入文坛)
感谢priorpost06  的热情帮忙哈。 因为本身DNA浓度不是很高，蛮担心再苯酚氯仿之后，就没剩多少了。  看了岛津的说明书， 检测限说是上样浓度>2 微升。   所以降低稀释倍数，使上样浓度提高到检测限上。 再次用岛津和Eppendorf测定， 两者值基本一致。 但蛋白杂质还是存在且不低，  看来还得先大量富集之后再酚纯化了。   再次感谢各位的帮助
赞一下 回复此楼
9楼2010-09-15 11:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biolinshen 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华东师范生物学326分，求调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 02:53 by mch6301012
[考研] 267求调剂 +5 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 5/250 2026-04-09 18:47 by stone_128
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +14 Naiko 2026-04-04 14/700 2026-04-09 16:56 by luoyongfeng
[考研] 085501机械英二77总分294求调剂，接受跨专业学习 +6 守法公民亓纪 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:55 by wp06
[考研] 材料295 +15 小英11 2026-04-03 16/800 2026-04-09 15:44 by only周
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考博] 材料方向考博，求推荐 +3 言语aaa 2026-04-05 4/200 2026-04-08 22:22 by nxgogo
[考研] 生物学学硕，初试351分，求调剂 +4 …～、王…～ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
[考研] 304求调剂 +16 c297914 2026-04-05 17/850 2026-04-08 13:00 by grayjzr
[考研] 301求调剂 +10 细胞相关蛋白 2026-04-03 10/500 2026-04-08 10:36 by tjzhao
[考博] 申博 +8 IQwQl 2026-04-04 8/400 2026-04-08 09:43 by 0608104024
[考研] 调剂求助（生物与医药） +6 @6952 2026-04-06 6/300 2026-04-07 23:52 by lys0704
[考研] 生物学363调剂求助 +7 fanzhang6666 2026-04-06 9/450 2026-04-07 17:37 by lijunpoly
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +10 cs0106 2026-04-05 12/600 2026-04-06 19:41 by 无际的草原
[考研] 复试调剂 +5 asdasdassda 2026-04-05 5/250 2026-04-06 09:32 by dongzh2009
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 男生，一志愿沪9生物学071000，初试308求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:26 by barlinike
[考研] 求 +5 化工专硕323分 2026-04-04 5/250 2026-04-05 08:02 by 544594351
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] 317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂 +6 YinTai 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:30 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭