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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教，DNA浓度怎么测定
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黑森林

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教，DNA浓度怎么测定已有16人参与

弱弱问个问题

提完基因组DNA后，测定浓度

用分光光度计测得OD260=1.00
根据公式计算浓度=1.000（OD260） * 50（ug/ml） *100（稀释倍数） =5 ug/ul

然后根据凝胶电泳，测得50 ng/ul

怎么差别这么大？
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1楼2011-03-01 19:46:34
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tanyu_hu

新虫 (初入文坛)
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lstt09nk(金币+3): 鼓励新虫交流 2011-03-02 18:18:40
引用回帖:
Originally posted by 黑森林 at 2011-03-01 19:46:34:
弱弱问个问题

提完基因组DNA后，测定浓度

用分光光度计测得OD260=1.00
根据公式计算浓度=1.000（OD260） * 50（ug/ml） *100（稀释倍数） =5 ug/ul

然后根据凝胶电泳，测得50 ng/ul

怎么差别这么大？

你可以用稀释梯度来验证一下用分光光度计测的是否准，如稀释25倍，50倍，100倍，如果得到的OD260值也成比例的话，说明分光光度计测得还是准的。
另外基因组DNA电泳会有很多带吧。
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10楼2011-03-02 11:09:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-03-02 18:17:04
当然是分光光度计准确了……电泳这么粗糙只是估算

另外电泳的数值你是如何估算出来的？
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2楼2011-03-01 20:44:53
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黑森林

金虫 (小有名气)
电泳是根据marker 定量的

但是两种方法差别也太大了……
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3楼2011-03-01 20:46:39
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yabing0324

金虫 (职业作家)
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引用回帖:
Originally posted by 黑森林 at 2011-03-01 19:46:34:
弱弱问个问题

提完基因组DNA后，测定浓度

用分光光度计测得OD260=1.00
根据公式计算浓度=1.000（OD260） * 50（ug/ml） *100（稀释倍数） =5 ug/ul

然后根据凝胶电泳，测得50 ng/ul

怎么差别这么大？

我们用的是核酸蛋白定量仪，打进去1.5微升，直接出浓度
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4楼2011-03-01 20:47:21
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黑森林

金虫 (小有名气)
我用的是稀释100倍后测OD值，比色皿的那种
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5楼2011-03-01 20:48:39
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)
有微型分光光度计啊，点一微升就可以测出含量，以及A260/A280等参数的。就是这个仪器很贵。
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6楼2011-03-01 21:42:56
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
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lstt09nk(金币+2): 鼓励新斑斑 2011-03-02 18:18:01
很正常，应该以分光光度计为准吧。

好像有种叫做NaroDrop的微型分光光度计测的还可以。
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
7楼2011-03-01 22:39:03
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walker2898

银虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by wanghuiyanyx at 2011-03-01 21:42:56:
有微型分光光度计啊，点一微升就可以测出含量，以及A260/A280等参数的。就是这个仪器很贵。

同意你的观点，用那个最好了，有杂质都能测出来，这个还方便。
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8楼2011-03-02 09:53:39
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+1): 感谢分享实验经验 2011-03-02 18:18:20
一般的测定可以用NanoDrop，微量的可以用DNA Nano chip或是Pico chip。刚好最近我也在做这方面的。


[ Last edited by nuoyaeva on 2011-3-2 at 10:06 ]
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生活是美好的
9楼2011-03-02 10:05:02
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