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biolinshen

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教:DNA浓度测定已有4人参与

手头有酶切后切胶纯化(OMEGA)样品两份, 用于qPCR定量。 所以要求对纯化后样品精确定量。100倍稀释后,测定浓度。 手头两台DNA浓度分光光度计,一台Eppendorf 的,一台岛津的。   对两份样品测定得出的浓度差异很大(35, 0)  vs (100, 45) 最主要问题还在于A 样本跑胶条带亮度远小于B样品。另外A260 /A 280 远小于 1.8. 我的问题

1. 有什么办法可以更好去除DNA样品中 蛋白等杂质呢? 我提取的质粒DNA, 酶切后进行胶纯化, 难道还不能保证DNA的纯度?

2.  紫外分光光度计,对DNA浓度的测定准确度如何?  问了不少人,似乎对其精度都表示怀疑。

对各位的建议,谢过先!
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girlfisher

金虫 (小有名气)

biolinshen(金币+3):感谢您的建议 2010-09-11 21:33:15
biolinshen(金币+2): 2010-09-12 19:49:07
切胶纯化然后又稀释100倍,这种情况一般你的DNA含量低于1ng/uL,用分光光度计已经完全不准了。
至少也要用原始样品在低样品消耗的nanodrop上测含量,不过还是建议用内参来定量或者用更加准确的Qubit方法确定模板含量。
3楼2010-09-11 20:54:08
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