应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教：DNA浓度测定
91/1返回列表
查看: 1953  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

biolinshen

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教：DNA浓度测定 已有4人参与

手头有酶切后切胶纯化（OMEGA）样品两份， 用于qPCR定量。 所以要求对纯化后样品精确定量。100倍稀释后，测定浓度。 手头两台DNA浓度分光光度计，一台Eppendorf 的，一台岛津的。   对两份样品测定得出的浓度差异很大（35， 0）  vs (100, 45) 最主要问题还在于A 样本跑胶条带亮度远小于B样品。另外A260 /A 280 远小于 1.8. 我的问题

1. 有什么办法可以更好去除DNA样品中 蛋白等杂质呢？ 我提取的质粒DNA, 酶切后进行胶纯化， 难道还不能保证DNA的纯度？

2.  紫外分光光度计，对DNA浓度的测定准确度如何？  问了不少人，似乎对其精度都表示怀疑。

对各位的建议，谢过先！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-11 19:41:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
不知道 顶一下 希望有人能够帮助
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
2楼2010-09-11 20:34:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

girlfisher

金虫 (小有名气)
biolinshen(金币+3):感谢您的建议 2010-09-11 21:33:15
biolinshen(金币+2): 2010-09-12 19:49:07
切胶纯化然后又稀释100倍，这种情况一般你的DNA含量低于1ng/uL，用分光光度计已经完全不准了。
至少也要用原始样品在低样品消耗的nanodrop上测含量，不过还是建议用内参来定量或者用更加准确的Qubit方法确定模板含量。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-09-11 20:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdqzsdqz

木虫 (著名写手)
同意三楼
回复此楼
4楼2010-09-11 23:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biolinshen

银虫 (初入文坛)
感谢这位， 你的回答给我很大的帮助。
引用回帖:
Originally posted by girlfisher at 2010-09-11 20:54:08:
切胶纯化然后又稀释100倍，这种情况一般你的DNA含量低于1ng/uL，用分光光度计已经完全不准了。
至少也要用原始样品在低样品消耗的nanodrop上测含量，不过还是建议用内参来定量或者用更加准确的Qubit方法确定模板 ...

赞一下 回复此楼
5楼2010-09-12 19:50:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

priorpost06

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:23:33
比值小于1.8说明你的DNA样品含有蛋白质，含有蛋白质的话，测算DNA肯定不准，而且会影响到PCR，要保证大于或是等于1.8，不能差距太大。
提取DNA的时候，离心速度要大小适宜，才能去除蛋白质或是最大限度减少蛋白质。
一般细菌用 12000r/min.  1.5mL 的离心管。
用紫外测DNA久必须要用石英比色皿或是比石英更好的，对照和溶解DNA的溶液要超纯。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-09-12 20:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongfangzz

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
好像用氯仿或是异丙醇就可以分离核酸和蛋白质吧
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-09-12 20:16:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

非池中物

过来学习一下
回复此楼
8楼2010-09-12 20:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biolinshen

银虫 (初入文坛)
感谢priorpost06  的热情帮忙哈。 因为本身DNA浓度不是很高，蛮担心再苯酚氯仿之后，就没剩多少了。  看了岛津的说明书， 检测限说是上样浓度>2 微升。   所以降低稀释倍数，使上样浓度提高到检测限上。 再次用岛津和Eppendorf测定， 两者值基本一致。 但蛋白杂质还是存在且不低，  看来还得先大量富集之后再酚纯化了。   再次感谢各位的帮助
赞一下 回复此楼
9楼2010-09-15 11:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biolinshen 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +10 chaojifeixia 2026-03-19 11/550 2026-03-20 20:32 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 281求调剂（0805） +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-03-18 5/250 2026-03-20 09:00 by ZHANG0tao
[考研] 材料专硕英一数二306 +6 z1z2z3879 2026-03-18 6/300 2026-03-20 08:49 by xingguangj
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by ！本暗一次！
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭