应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教：DNA浓度测定
91/1返回列表
查看: 2021  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

biolinshen

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教：DNA浓度测定 已有4人参与

手头有酶切后切胶纯化（OMEGA）样品两份， 用于qPCR定量。 所以要求对纯化后样品精确定量。100倍稀释后，测定浓度。 手头两台DNA浓度分光光度计，一台Eppendorf 的，一台岛津的。   对两份样品测定得出的浓度差异很大（35， 0）  vs (100, 45) 最主要问题还在于A 样本跑胶条带亮度远小于B样品。另外A260 /A 280 远小于 1.8. 我的问题

1. 有什么办法可以更好去除DNA样品中 蛋白等杂质呢？ 我提取的质粒DNA, 酶切后进行胶纯化， 难道还不能保证DNA的纯度？

2.  紫外分光光度计，对DNA浓度的测定准确度如何？  问了不少人，似乎对其精度都表示怀疑。

对各位的建议，谢过先！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-11 19:41:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)
不知道 顶一下 希望有人能够帮助
赞一下 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
2楼2010-09-11 20:34:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

girlfisher

金虫 (小有名气)
biolinshen(金币+3):感谢您的建议 2010-09-11 21:33:15
biolinshen(金币+2): 2010-09-12 19:49:07
切胶纯化然后又稀释100倍，这种情况一般你的DNA含量低于1ng/uL，用分光光度计已经完全不准了。
至少也要用原始样品在低样品消耗的nanodrop上测含量，不过还是建议用内参来定量或者用更加准确的Qubit方法确定模板含量。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-09-11 20:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdqzsdqz

木虫 (著名写手)
同意三楼
回复此楼
4楼2010-09-11 23:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biolinshen

银虫 (初入文坛)
感谢这位， 你的回答给我很大的帮助。
引用回帖:
Originally posted by girlfisher at 2010-09-11 20:54:08:
切胶纯化然后又稀释100倍，这种情况一般你的DNA含量低于1ng/uL，用分光光度计已经完全不准了。
至少也要用原始样品在低样品消耗的nanodrop上测含量，不过还是建议用内参来定量或者用更加准确的Qubit方法确定模板 ...

赞一下 回复此楼
5楼2010-09-12 19:50:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

priorpost06

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:23:33
比值小于1.8说明你的DNA样品含有蛋白质，含有蛋白质的话，测算DNA肯定不准，而且会影响到PCR，要保证大于或是等于1.8，不能差距太大。
提取DNA的时候，离心速度要大小适宜，才能去除蛋白质或是最大限度减少蛋白质。
一般细菌用 12000r/min.  1.5mL 的离心管。
用紫外测DNA久必须要用石英比色皿或是比石英更好的，对照和溶解DNA的溶液要超纯。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-09-12 20:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongfangzz

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
好像用氯仿或是异丙醇就可以分离核酸和蛋白质吧
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-09-12 20:16:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

非池中物

过来学习一下
回复此楼
8楼2010-09-12 20:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biolinshen

银虫 (初入文坛)
感谢priorpost06  的热情帮忙哈。 因为本身DNA浓度不是很高，蛮担心再苯酚氯仿之后，就没剩多少了。  看了岛津的说明书， 检测限说是上样浓度>2 微升。   所以降低稀释倍数，使上样浓度提高到检测限上。 再次用岛津和Eppendorf测定， 两者值基本一致。 但蛋白杂质还是存在且不低，  看来还得先大量富集之后再酚纯化了。   再次感谢各位的帮助
赞一下 回复此楼
9楼2010-09-15 11:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biolinshen 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 269求调剂 +8 跪求收留。 2026-04-04 8/400 2026-04-11 10:50 by zhq0425
[考研] 343求调剂 +8 王国帅 2026-04-10 8/400 2026-04-11 10:50 by qingpingzhu
[考研] 288求调剂 +15 代fish 2026-04-09 16/800 2026-04-11 10:26 by wwj2530616
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 293求调剂 +6 勇远库爱314 2026-04-08 6/300 2026-04-11 10:08 by zhq0425
[考研] 287求调剂 +15 Fnhc 2026-04-07 21/1050 2026-04-10 19:09 by chemisry
[考研] 0702物理学学硕299求调剂 +6 祁柒连 2026-04-06 6/300 2026-04-10 11:10 by Roomoo
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +16 路痴小琪 2026-04-05 16/800 2026-04-10 08:08 by kangsm
[考研] 材料专硕调剂 +16 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 17/850 2026-04-09 21:16 by wutongshun
[考研] 求调剂，262机械专硕 +6 嗯yyl 2026-04-08 6/300 2026-04-09 12:01 by zhouyuwinner
[考研] 求调剂 一志愿西南交通大学085701环境工程 282分 +15 多多爱吃汉堡 2026-04-04 16/800 2026-04-08 11:39 by i_cooler
[考研] 生物医药调剂｜SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 071000生物学，一志愿深圳大学296分，求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +6 rious 2026-04-05 6/300 2026-04-07 09:42 by jp9609
[考研] 材料调剂 +5 小刘同学吖吖 2026-04-06 5/250 2026-04-06 18:34 by sherry_1901
[考研] 277求调剂 +5 考研调剂lxh 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:03 by chy09050039
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 可跨专业调剂 +3 周的得地 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:21 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭