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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 从枯草里提取的质粒电泳后条带很奇怪
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zwlr116812

金虫 (正式写手)

[求助] 从枯草里提取的质粒电泳后条带很奇怪 已有1人参与

第1张图是第一次从BT中提取的质粒，第2张图是从同样的BT中提的质粒，第三张图是从第二次提的质粒转化到大肠杆菌中后提的质粒，第4张图是转化BS 后从BS中提的质粒，第5张是酶切的，marker后面是从大肠杆菌中提的质粒的双酶切的 ，这个确定是对的。后面的就是从BS中提的质粒双酶切的。 我现在确定我要的质粒在大肠杆菌中转化进去了，就是后面从BS中提的让我费解了 ，难道提的是基因组，或者是假阳性，请高手帮我解答下  在线求解
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    • 2011-12-04 16:00:19, 330.05 K
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1楼 2011-12-04 16:05:56
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-12-05 17:49:44
zwlr116812(金币+1): 谢谢 2011-12-06 08:40:53
下次用jpg格式的好伐？应该你直接提的是基因组了吧，跟我做的Bp的基因组一个样，看marker也是这样的
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显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-12-04 21:12:11
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牛红

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助！ 2011-12-05 17:50:23
zwlr116812(金币+1): 我是用质粒试剂盒提取的 在solution1 后加了溶菌酶 2011-12-06 08:42:20
提取基因组DNA时染色体的断裂有点过度了吧？条带怎么拖尾的如此厉害
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赢得不够是因为心智还不够高远
3楼2011-12-05 09:20:36
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zwlr116812

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-12-04 21:12:11:
下次用jpg格式的好伐？应该你直接提的是基因组了吧，跟我做的Bp的基因组一个样，看marker也是这样的

文件太大了  上传图片失败
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4楼2011-12-06 08:44:22
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牛红

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒抽提试剂盒中加完S2后，DNA（包括质粒DNA和染色体DNA）和蛋白质同时变性，S3加入后质粒DNA能够复性并且溶于上清，但染色体DNA却仍然呈絮状，质粒抽提试剂盒的下一步是离心去除蛋白和基因组DNA，所以拿小抽试剂盒基因组DNA会受影响
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赢得不够是因为心智还不够高远
5楼2011-12-06 13:38:40
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zwlr116812

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 牛红 at 2011-12-05 09:20:36:
提取基因组DNA时染色体的断裂有点过度了吧？条带怎么拖尾的如此厉害

我主要是想提质粒的 只是条带看起来像基因组的条带，加了s2后溶液是澄清的 ，加了s3后也有絮状白色沉淀，但是就是离心后不好吸，有很多细碎的漂浮物，加大离心时间，转速都还是没办法
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6楼2011-12-06 17:42:33
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Haiwen9

金虫 (小有名气)
楼主，求分享下提取Bt质粒的方法，非常感谢！
E-mail：haiwen3895583@163.com
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Life~is~not~easy~for~everyone！
7楼2015-04-17 13:34:25
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coostudent

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by zwlr116812 at 2011-12-06 17:42:33
我主要是想提质粒的 只是条带看起来像基因组的条带，加了s2后溶液是澄清的 ，加了s3后也有絮状白色沉淀，但是就是离心后不好吸，有很多细碎的漂浮物，加大离心时间，转速都还是没办法...

加完P3之后冰上静止15min后再离心，上清液是比较澄清的
我想问一下楼主，提取质粒的时候你用的菌液的体积是多少啊
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8楼2023-02-08 21:37:21
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