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zwlr116812

金虫 (正式写手)

[求助] 从枯草里提取的质粒电泳后条带很奇怪 已有1人参与

第1张图是第一次从BT中提取的质粒,第2张图是从同样的BT中提的质粒,第三张图是从第二次提的质粒转化到大肠杆菌中后提的质粒,第4张图是转化BS 后从BS中提的质粒,第5张是酶切的,marker后面是从大肠杆菌中提的质粒的双酶切的 ,这个确定是对的。后面的就是从BS中提的质粒双酶切的。 我现在确定我要的质粒在大肠杆菌中转化进去了,就是后面从BS中提的让我费解了 ,难道提的是基因组,或者是假阳性,请高手帮我解答下  在线求解
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-12-05 17:49:44
zwlr116812(金币+1): 谢谢 2011-12-06 08:40:53
下次用jpg格式的好伐?应该你直接提的是基因组了吧,跟我做的Bp的基因组一个样,看marker也是这样的
显微镜下的世界很精彩!
2楼2011-12-04 21:12:11
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牛红

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励应助! 2011-12-05 17:50:23
zwlr116812(金币+1): 我是用质粒试剂盒提取的 在solution1 后加了溶菌酶 2011-12-06 08:42:20
提取基因组DNA时染色体的断裂有点过度了吧?条带怎么拖尾的如此厉害
赢得不够是因为心智还不够高远
3楼2011-12-05 09:20:36
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zwlr116812

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-12-04 21:12:11:
下次用jpg格式的好伐?应该你直接提的是基因组了吧,跟我做的Bp的基因组一个样,看marker也是这样的

文件太大了  上传图片失败
4楼2011-12-06 08:44:22
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牛红

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒抽提试剂盒中加完S2后,DNA(包括质粒DNA和染色体DNA)和蛋白质同时变性,S3加入后质粒DNA能够复性并且溶于上清,但染色体DNA却仍然呈絮状,质粒抽提试剂盒的下一步是离心去除蛋白和基因组DNA,所以拿小抽试剂盒基因组DNA会受影响
赢得不够是因为心智还不够高远
5楼2011-12-06 13:38:40
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zwlr116812

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 牛红 at 2011-12-05 09:20:36:
提取基因组DNA时染色体的断裂有点过度了吧?条带怎么拖尾的如此厉害

我主要是想提质粒的 只是条带看起来像基因组的条带,加了s2后溶液是澄清的 ,加了s3后也有絮状白色沉淀,但是就是离心后不好吸,有很多细碎的漂浮物,加大离心时间,转速都还是没办法
6楼2011-12-06 17:42:33
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Haiwen9

金虫 (小有名气)

楼主,求分享下提取Bt质粒的方法,非常感谢!
E-mail:haiwen3895583@163.com
Life~is~not~easy~for~everyone!
7楼2015-04-17 13:34:25
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coostudent

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by zwlr116812 at 2011-12-06 17:42:33
我主要是想提质粒的 只是条带看起来像基因组的条带,加了s2后溶液是澄清的 ,加了s3后也有絮状白色沉淀,但是就是离心后不好吸,有很多细碎的漂浮物,加大离心时间,转速都还是没办法...

加完P3之后冰上静止15min后再离心,上清液是比较澄清的
我想问一下楼主,提取质粒的时候你用的菌液的体积是多少啊
8楼2023-02-08 21:37:21
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