24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2958  |  回复: 5

天鸟

木虫 (正式写手)

[交流] 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增 已有4人参与

我的目的片段560bp,连接转化后,进行菌落PCR,出现非特异性扩增。如下图

在500-300bp之间有个条带,不知道是什么?我的载体是PMD 18-T,谢谢大家
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

快乐生活,我快乐
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
信息给多点会好些。有没有做对照?这对引物P其他模板有这个条带嘛?
2楼2011-08-10 23:08:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 菌落PCR确实经常有杂带。 2011-08-10 23:22:19
我用M13引物做T载体菌落PCR验证,也出现过非特异性条带。
菌落PCR有非特异性条带,我都当是正常现象的。如果提质粒PCR还是有非特异性条带就不太正常了,一般都是送测的。
3楼2011-08-10 23:16:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): good 2011-08-11 11:59:17
正常,细菌基因组没准有同源区哦。
挑几个菌,提质粒,做下酶切。
4楼2011-08-11 06:28:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+4): 就是这样! 2011-08-11 11:59:38
有非特异性条带很正常,你可以再做一次,将退火温度提高看看,如果非特异性条带依然存在,只能说明你的引物特异性不是很好;

不过进行PCR验证连接只是一个初步筛选的一个过程,没有必要纠结这么多,下一步你可以将能够扩增出目的片段的那个菌进行质粒的提取,然后进行酶切验证,如果都没有什么问题,那么克隆就算做成功了,就可以进行下游工作了!

祝你好运!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-08-11 09:17:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天鸟

木虫 (正式写手)

大家给的意见真是好,谢谢大家,我直接拿去测序好了
快乐生活,我快乐
6楼2011-08-11 10:00:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 天鸟 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-04 9/450 2026-04-06 00:06 by 永字号
[考研] 材料求调剂 +11 一样YWY 2026-04-05 11/550 2026-04-05 23:36 by 来看流星雨10
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +4 chenxrlkx 2026-04-05 6/300 2026-04-05 18:38 by imissbao
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 一志愿郑大0705求调剂 +3 橘十一 2026-04-02 4/200 2026-04-05 00:05 by chongya
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 材料工程085601数二英一335求调剂 +6 双马尾痞老板2 2026-03-31 6/300 2026-04-04 22:29 by hemengdong
[考研] 材料科学与工程调剂 +19 深V宿舍吧 2026-03-30 20/1000 2026-04-04 22:13 by hemengdong
[考研] 085601,一志愿厦大334复试被刷求调剂 +13 曾仰之 2026-04-03 15/750 2026-04-04 20:13 by dongzh2009
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 326求调剂 +3 9ahye 2026-04-02 4/200 2026-04-03 08:43 by Jaylen.
[考研] 材料化工340求调剂 +5 jhx777 2026-03-30 5/250 2026-04-02 12:45 by smileboy2006
[考研] 求调剂推荐 +3 南山南@ 2026-04-01 3/150 2026-04-02 12:09 by xiaoranmu
[考研] 材料工程322分 +8 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 8/400 2026-04-02 11:53 by 3041
[考研] 一志愿北交大材料工程,总分358 +4 cs0106 2026-04-01 4/200 2026-04-02 07:42 by 尚水阁主
[考研] 279求调剂 +7 莫xiao 2026-04-01 7/350 2026-04-01 22:05 by 客尔美德
[考研] 材料专业调剂 +5 啦啦啦哭 2026-03-31 6/300 2026-04-01 16:48 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见