24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

天鸟

木虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
金币: 2548.5
散金: 52
红花: 7
帖子: 515
在线: 186.4小时
虫号: 627037
注册: 2008-10-15
性别: GG
专业: 环境微生物学

[交流] 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增已有4人参与

我的目的片段560bp，连接转化后，进行菌落PCR，出现非特异性扩增。如下图

在500-300bp之间有个条带，不知道是什么？我的载体是PMD 18-T，谢谢大家

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

双酶切已经有12人回复
菌落PCR筛选已经有17人回复
关于转化、菌落PCR 已经有8人回复
PCR扩增去除终止密码子已经有4人回复
连接后转化子PCR出现非特异性的条带已经有10人回复
PCR ，双酶切，连接问题已经有17人回复
RT后扩增到的条带出现非特异性，该如何处理已经有4人回复
胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题已经有8人回复
PCR非特异性扩增已经有6人回复
【求助/交流】大肠杆菌转化PCR鉴定，没有阳性菌落已经有5人回复
【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？已经有10人回复
【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？已经有20人回复
【求助/交流】菌落PCR问题已经有7人回复
【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？已经有4人回复
【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题已经有20人回复

快乐生活，我快乐

1楼 2011-08-10 22:39:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

专家经验: +57
MolEPI: 106
应助: 95 (初中生)
贵宾: 0.263
金币: 16382.3
散金: 593
红花: 74
沙发: 9
帖子: 3648
在线: 288.2小时
虫号: 441757
注册: 2007-10-27
专业: 微生物生理与生物化学
管辖: 微生物

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+4): 就是这样！ 2011-08-11 11:59:38

有非特异性条带很正常，你可以再做一次，将退火温度提高看看，如果非特异性条带依然存在，只能说明你的引物特异性不是很好；

不过进行PCR验证连接只是一个初步筛选的一个过程，没有必要纠结这么多，下一步你可以将能够扩增出目的片段的那个菌进行质粒的提取，然后进行酶切验证，如果都没有什么问题，那么克隆就算做成功了，就可以进行下游工作了！

祝你好运！

赞一下(2人)

回复此楼

Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!

5楼2011-08-11 09:17:57