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yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR筛选

将片段与载体连接后,转化DH5α,LB板含有抗生素,结果菌落长的特别少,而且只是在边上长,进行菌落PCR筛选,结果都有目的条带,但是,经过筛选的菌落划到另一块涂有抗生素的LB平板上却不长,是怎么回事呢?我感觉自己图的板还算均匀
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
抗生素浓度是否合适?
质粒是否丢了?
try again
god bless
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2012-02-26 21:37:07
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biotech_100

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是抗生素浓度的问题吧!边上能长出来,可能是因为培养基中抗生素没混匀好吧,所以只有边上能长。两次的LB培养基都是同一批倒的平板吗?
3楼2012-02-26 22:40:02
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你要扩的片段DH5α里有吗,这是个比较愚蠢的问题,但好多新手都会忽略。
4楼2012-02-27 00:28:37
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
摇个菌,提个质粒,酶切一下先。平板的抗性注意别弄错。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
5楼2012-02-27 09:41:44
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天鸟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yguang at 2012-02-27 00:28:37:
你要扩的片段DH5α里有吗,这是个比较愚蠢的问题,但好多新手都会忽略。

用的载体的引物扩增,一般不会出现你说的DH5a里有的情况吧
快乐生活,我快乐
6楼2012-02-27 09:48:35
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普通回帖

yeshui

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 天使托 at 2012-02-26 21:37:07:
抗生素浓度是否合适?
质粒是否丢了?
try again
god bless

我一直都用那个浓度啊,做了两次了,而且是三个载体一块做的啊,奇怪了
7楼2012-02-27 11:15:55
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yeshui

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by biotech_100 at 2012-02-26 22:40:02:
应该是抗生素浓度的问题吧!边上能长出来,可能是因为培养基中抗生素没混匀好吧,所以只有边上能长。两次的LB培养基都是同一批倒的平板吗?

两批板啊,我的抗生素是先倒板再涂布抗生素,然后再涂布菌,以前都那样图,感觉不是没涂匀
8楼2012-02-27 11:17:47
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yeshui

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by yguang at 2012-02-27 00:28:37:
你要扩的片段DH5α里有吗,这是个比较愚蠢的问题,但好多新手都会忽略。

没有的话,做PCR怎么会扩出来呢,我就是不明白,请指教啊
9楼2012-02-27 11:18:49
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yeshui

铁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hongqifei at 2012-02-27 09:41:44:
摇个菌,提个质粒,酶切一下先。平板的抗性注意别弄错。

确定抗性没弄错,摇哪个菌啊?
10楼2012-02-27 11:19:58
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