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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】寻求用通用引物进行菌落PCR，无条带的原因
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nigel.lin

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】寻求用通用引物进行菌落PCR，无条带的原因

小弟这几天用通用引物进行菌落PCR筛选阳性克隆居然无条带，而阳性对照用空质粒当模板能p出较小的条带；如果是没连上目的基因，也应该出现与阳性对照同大小片段才对啊。很诡异！以前我都这样做都没出现这种情况。  请各位资深指点下，非常感谢！！！
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1楼 2011-01-04 17:20:32
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DH5a

银虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-04 19:06:56
nigel.lin(金币+2):感谢回复 2011-01-04 21:16:33
第一的你的菌是不是很难的溶解导致你的DNA没有释放出来。可以适当把预变性时间延长。第二，增加引物浓度。
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2楼2011-01-04 17:51:12
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nigel.lin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by DH5a at 2011-01-04 17:51:12:
第一的你的菌是不是很难的溶解导致你的DNA没有释放出来。可以适当把预变性时间延长。第二，增加引物浓度。

预变性10min，以前都这样没问题啊； 我在20微升体系中加0.5微升，以前也这样也没问题啊。
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3楼2011-01-04 18:07:36
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zx1984

木虫 (正式写手)
nigel.lin(金币+2):感谢回复 2011-01-04 21:16:51
有可能没挑到菌，建议挑3-6个做一下，还有加长预变性时间和延伸时间。
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4楼2011-01-04 19:43:54
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