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【求助/交流】请问PCR后的电泳只目的片段不清晰,并且出现引物带,应该从哪些方面调整
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emingju
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【求助/交流】请问PCR后的电泳只目的片段不清晰,并且出现引物带,应该从哪些方面调整
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2010-12-13 20:54:04
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跑个大梯度。
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2010-12-13 21:19:03
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emingju(金币+5):谢谢你的建议,我再尝试一下,祝你试验顺利 2010-12-13 21:33:55
一般情况下只会出现目的条带,即便不清楚也只是目的条带,但是有时出现杂带,我考虑的原因是酶的问题,有些时候酶也会将不相关的条带扩增出来,我最近也是有杂带,但是大批量pcr出来以后,然后做个切胶纯化,再将目的基因纯化出来就可以进行下游操作了!
祝好运!
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2010-12-13 21:31:20
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):给个红包,谢谢回帖交流
目的片段不清楚的原因有很多,有引物二聚体的原因 ,可能是你的引物加多了,也可能的模板加的少了,你有杂带出现么?
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2010-12-13 21:45:49
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emingju
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虫号: 834471
目的片段很模糊,下面还有条模糊地条带,我认为是引物带吧,可能是我的引物加的太多了 我再减少引物量或者增多点模板的量吧 ,谢谢你
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5楼
2010-12-14 19:05:54
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小木虫(金币
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):给个红包,谢谢回帖交流
如果是引物二聚体的话,它是小于100bp,祝你好运!
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6楼
2010-12-14 22:26:55
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leaf91626
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也碰到同样的问题,细菌的PCR产物中只出现 100bp的条带,很奇怪,我用的PCR MIX 体系,请高手指点
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7楼
2012-04-09 23:40:27
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