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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR后电泳是特异性条带，但测序总是出现结合问题。怎么办？
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anglemanfred

银虫 (正式写手)

[求助] PCR后电泳是特异性条带，但测序总是出现结合问题。怎么办？

很是焦急！已经做了好几次了。请各位虫友帮帮忙！
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1楼 2012-03-01 17:36:55
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
anglemanfred(金币+2): ★★★很有帮助 2012-03-05 12:34:04
第一序列多长？
第二、可以考虑克隆测序，这样不容易产生结合。
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总有一天我要修改用户名。
2楼2012-03-01 18:58:25
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cindybrella

铁杆木虫 (知名作家)

魔女
帮顶!我也不懂~~哎
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请给我勇气和力量，让我自由的翱翔~~
3楼2012-03-01 20:35:04
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
anglemanfred(金币+1): ★有帮助 2012-03-05 12:34:58
b保险点的话还是做个TAclone再测序，如果不想做TA，就用2个PCR引物直接测序，总会成功一个的吧
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4楼2012-03-01 21:52:51
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
anglemanfred(金币+1): 谢谢！ 2012-03-02 23:42:22
换个测序公司试一下，有的公司就是克隆在载体上也测不出来！
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jiayoubashaonian
5楼2012-03-01 22:49:09
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
anglemanfred(金币+3): 学习啦！ 2012-03-02 23:41:49
我的PCR产物电泳很好，测序也是结合问题。测序公司反馈说是产物不纯，或者引物特异性不好。你可以考虑重新优化反应体系（不过看来你是不做这步了），或者把目的片段序列告诉测序公司，他们会设计中间引物安排测序。
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6楼2012-03-02 10:33:52
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anglemanfred

银虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 137167741 at 2012-03-01 18:58:25:
第一序列多长？
第二、可以考虑克隆测序，这样不容易产生结合。

一个是843，一个是947bp。
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7楼2012-03-05 12:33:20
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anglemanfred

银虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by cindybrella at 2012-03-01 20:35:04:
帮顶!我也不懂~~哎

嘿嘿嘿。
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8楼2012-03-05 12:33:47
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chubing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以自己克隆转菌测序或者请生物公司转菌测序。1000bp以下是可以转的，这样应该没有问题，就可以测出来了。
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9楼2012-03-05 14:49:29
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)
学习 了
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快乐奋斗，创造所有。
10楼2012-03-12 20:34:15
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