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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr结果电泳条带很淡
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毛建芳

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】pcr结果电泳条带很淡 已有14人参与

PCR产物经电泳检测，条带很淡，请各位大侠指点指点。
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1楼 2010-11-11 22:14:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bigboy123

铜虫 (小有名气)
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-12 11:01:51
这个呀，杂带太多，把原料都消耗掉了，增加一下各组份的用量，然后提高一下退火温度，然后把时间调整一下，提高特异性就可以了。把体系放大一些也可以。引物裁短点也有用。
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供应PCR增量剂
8楼2010-11-12 10:01:04
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普通回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-12 10:00:20
第三个可能是对的
其他的可能是非特异性扩增
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小木虫之有关部门负责人
2楼2010-11-11 22:52:35
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
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板凳哦
PCR结果不明显当然可能是反应条件的问题，不过你可以试试把循环数多加几个，或者退火温度降低一点
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一直向前！
3楼2010-11-12 00:00:52
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

用梯度PCR

★
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摸索一下退火温度条件先。
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未来天空才是极限
4楼2010-11-12 08:45:36
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
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lstt09nk(金币+1):鼓励下 2010-11-12 09:54:08
应该是没P出来
在摸一下PCR条件吧，退火温度还有镁离子浓度，
再不行，你就得考虑引物的问题了
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
5楼2010-11-12 09:09:07
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xj871008

铁杆木虫 (著名写手)

升斗小民
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lstt09nk(金币+1):感谢交流 2010-11-12 09:54:22
楼主可以看看电泳条带最下端有没有白色条带，如果有就是引物聚合物，说明引物不对，如果没有引物就没问题。条带淡有很多原因，可能是模板DNA浓度不够或不纯，或者是循环太少，或者是和染料混合不充分，好好多原因呢。不妨多看看参考书吧，我也就只知道这么多了。
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6楼2010-11-12 09:30:21
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-12 10:00:34
不知道哪一条带是你的目的条带，不过从图上能看出你的pcr特异性很差，可能是引物的问题，也可能是扩增条件的问题，自己想办法排除一下吧
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2010-11-12 09:59:42
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muxiaoxiao

新虫 (初入文坛)
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-12 11:01:41
最近我也陷在PCR的循环里跳不出来呀，退火温度primer
设计时给了一个，合成引物时公司给了一个，相差还挺大的，不知道该信哪个
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9楼2010-11-12 10:06:11
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xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星
同意7楼的建议！
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海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！
10楼2010-11-12 10:32:28
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