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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物的电泳条带出问题了！加了oading buffer和不加loading buffer的大小不一样！！
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ciciweiwei

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物的电泳条带出问题了！加了oading buffer和不加loading buffer的大小不一样！！已有1人参与

如图，本来上样的时候一时分心忘了加loading buffer了，因为之前电泳就一直没跑好也怀疑过可能跟loading buffer有关，索性就做了加loading buffer和没加loading buffer的对比。1,3,5,6,7是加了loading buffer的，2和4没有加。
所有的样都是同样的引物，PCR条件不一样。很奇怪，究竟是引物不行压根没P出来还是怎么回事，已经为PCR的问题纠结了一个多月了。恳求各位帮忙！！！
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1楼2012-03-29 18:53:15
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回帖置顶 ( 共有1个 )

ciciweiwei

铁虫 (初入文坛)
西瓜: 回帖置顶 2012-03-29 21:55:48
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-29 19:37:35:
不是一样的样品吧？同一个样品，加/不加loading buffer，这样子比较才有意义哦。

补充一下，1和2是一样的，3和4是一样的，后面的567都不一样
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6楼2012-03-29 20:25:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

2B青年2B青年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你这个是正常的  没有加loading buffer的条带跑出来显示比加了loading buffer的条带要略大 这是因为Taq酶结合在DNA上的结果 导致迁移率下降  10*loading buffer里面是有SDS的  加了loading buffer之后 Taq会变性 脱离 因而条带显示的小点
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12楼2012-11-30 20:59:37
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普通回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

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不是一样的样品吧？同一个样品，加/不加loading buffer，这样子比较才有意义哦。
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2楼2012-03-29 19:37:35
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水果的滋味

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不加buffer怎么能有颜色，换个试剂，之前我也是因为这个问题，浪费了一个多月的时间纠结
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3楼2012-03-29 20:00:01
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xiaoyugutou

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不加loading 样品是怎么沉到上样孔里的呢？
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4楼2012-03-29 20:00:14
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hdoublel

木虫 (职业作家)

未知

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得不是loading buffer的问题，很明显，你这里的条带大小不一致。loading buffer怎么可能改变PCR产物的条件呢，肯定是PCR结果不一致造成的。
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啦啦啦
5楼2012-03-29 20:06:34
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fanfenggui

金虫 (正式写手)
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-01 17:46:16
实验室也遇到过，SSR电泳，加不加loading buffer条带不一样……
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爱由心起！
7楼2012-03-31 23:33:46
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恶魔眼球

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-01 17:46:10
楼主所说的样品一样是指从用同一模板P出来的,还是就是P好的一个管里的？如果是前者，应该是P的时候就出问题了吧。条带的大小跟loading buffer 没有关系啊~不加loading buffer,会造成样品飘出，这样也只会使条带变浅而已。。
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8楼2012-04-01 09:22:43
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zx6291

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-01 17:46:26
Loading buffer主要成分是：溴酚蓝和甘油，有些还含有EDTA和Tris-Hcl.

作用是增加DNA的比重，方便上样（比重比电泳缓冲液大更容易沉在上样孔）。条带的大小跟loading buffer 没有关系，
推测是不是显色剂的原因？
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9楼2012-04-01 10:08:45
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fzw0417

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励新虫交流 2012-04-01 17:45:40
我觉得你的loadingbuffer可能有问题。我以前也遇到过类似的情况，换了新的loadingbuffer就好了
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10楼2012-04-01 12:19:18
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