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ciciweiwei

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物的电泳条带出问题了!加了oading buffer和不加loading buffer的大小不一样!! 已有1人参与

如图,本来上样的时候一时分心忘了加loading buffer了,因为之前电泳就一直没跑好也怀疑过可能跟loading buffer有关,索性就做了加loading buffer和没加loading buffer的对比。1,3,5,6,7是加了loading buffer的,2和4没有加。
所有的样都是同样的引物,PCR条件不一样。很奇怪,究竟是引物不行压根没P出来还是怎么回事,已经为PCR的问题纠结了一个多月了。恳求各位帮忙!!!
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zx6291

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-01 17:46:26
Loading buffer主要成分是:溴酚蓝和甘油,有些还含有EDTA和Tris-Hcl.

作用是增加DNA的比重,方便上样(比重比电泳缓冲液大更容易沉在上样孔)。条带的大小跟loading buffer 没有关系,
推测是不是显色剂的原因?
9楼2012-04-01 10:08:45
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不是一样的样品吧?同一个样品,加/不加loading buffer,这样子比较才有意义哦。
2楼2012-03-29 19:37:35
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水果的滋味

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不加buffer怎么能有颜色,换个试剂,之前我也是因为这个问题,浪费了一个多月的时间纠结
3楼2012-03-29 20:00:01
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xiaoyugutou

捐助贵宾 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不加loading 样品是怎么沉到上样孔里的呢?
4楼2012-03-29 20:00:14
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