24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 5773  |  回复: 12

ciciweiwei

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物的电泳条带出问题了!加了oading buffer和不加loading buffer的大小不一样!! 已有1人参与

如图,本来上样的时候一时分心忘了加loading buffer了,因为之前电泳就一直没跑好也怀疑过可能跟loading buffer有关,索性就做了加loading buffer和没加loading buffer的对比。1,3,5,6,7是加了loading buffer的,2和4没有加。
所有的样都是同样的引物,PCR条件不一样。很奇怪,究竟是引物不行压根没P出来还是怎么回事,已经为PCR的问题纠结了一个多月了。恳求各位帮忙!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

2B青年2B青年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你这个是正常的  没有加loading buffer的条带跑出来显示比加了loading buffer的条带要略大 这是因为Taq酶结合在DNA上的结果 导致迁移率下降  10*loading buffer里面是有SDS的  加了loading buffer之后 Taq会变性 脱离 因而条带显示的小点
12楼2012-11-30 20:59:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不是一样的样品吧?同一个样品,加/不加loading buffer,这样子比较才有意义哦。
2楼2012-03-29 19:37:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水果的滋味

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不加buffer怎么能有颜色,换个试剂,之前我也是因为这个问题,浪费了一个多月的时间纠结
3楼2012-03-29 20:00:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyugutou

捐助贵宾 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不加loading 样品是怎么沉到上样孔里的呢?
4楼2012-03-29 20:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdoublel

木虫 (职业作家)

未知

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得不是loading buffer的问题,很明显,你这里的条带大小不一致。loading buffer怎么可能改变PCR产物的条件呢,肯定是PCR结果不一致造成的。
啦啦啦
5楼2012-03-29 20:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ciciweiwei

铁虫 (初入文坛)

西瓜: 回帖置顶 2012-03-29 21:55:48
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-29 19:37:35:
不是一样的样品吧?同一个样品,加/不加loading buffer,这样子比较才有意义哦。

补充一下,1和2是一样的,3和4是一样的,后面的567都不一样
6楼2012-03-29 20:25:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanfenggui

金虫 (正式写手)


西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-01 17:46:16
实验室也遇到过,SSR电泳,加不加loading buffer条带不一样……
爱由心起!
7楼2012-03-31 23:33:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔眼球

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-01 17:46:10
楼主所说的样品一样是指从用同一模板P出来的,还是就是P好的一个管里的?如果是前者,应该是P的时候就出问题了吧。条带的大小跟loading buffer 没有关系啊~不加loading buffer,会造成样品飘出,这样也只会使条带变浅而已。。
8楼2012-04-01 09:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zx6291

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-01 17:46:26
Loading buffer主要成分是:溴酚蓝和甘油,有些还含有EDTA和Tris-Hcl.

作用是增加DNA的比重,方便上样(比重比电泳缓冲液大更容易沉在上样孔)。条带的大小跟loading buffer 没有关系,
推测是不是显色剂的原因?
9楼2012-04-01 10:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fzw0417

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励新虫交流 2012-04-01 17:45:40
我觉得你的loadingbuffer可能有问题。我以前也遇到过类似的情况,换了新的loadingbuffer就好了
10楼2012-04-01 12:19:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ciciweiwei 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +8 汪!?! 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:02 by 逆水乘风
[考研] 269求调剂 +11 啊啊我我 2026-04-07 11/550 2026-04-11 16:45 by vgtyfty
[考研] 一志愿新疆大学085401,314分 +3 咔咔咔咔9 2026-04-05 3/150 2026-04-11 14:31 by 猪会飞
[考研] 一志愿211生物学280分 求调剂 +7 李rien 2026-04-05 7/350 2026-04-11 11:16 by 逆水乘风
[考研] 化学工程调剂289 +43 yang婷 2026-04-07 49/2450 2026-04-11 10:37 by 紫曦紫棋
[考研] 087100初试311求调剂 +4 任雅琴 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:33 by zhq0425
[考研] 080500求调剂 +17 黄宇博 2026-04-06 17/850 2026-04-11 08:36 by zhq0425
[考研] 302分求调剂 +9 凡语祈愿 2026-04-08 10/500 2026-04-10 23:26 by 314126402
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 284求调剂 +19 梵@@ 2026-04-06 21/1050 2026-04-10 21:12 by zhouxiaoyu
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +8 求上岸的小王 2026-04-10 8/400 2026-04-10 15:09 by hemengdong
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 337求调剂 +4 Gky09300550, 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:18 by 帕尔马拉特
[考研] 材料调剂 +10 18815505510 2026-04-09 11/550 2026-04-09 17:07 by 544594351
[考研] 085600材料与化工,求调剂 +11 won_qii 2026-04-07 11/550 2026-04-09 17:03 by luoyongfeng
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 一志愿211,化学学硕,310分,本科重点双非,求调剂 +10 努力奋斗112 2026-04-07 10/500 2026-04-08 15:01 by screening
[考研] 277求调剂 +4 考研调剂lxh 2026-04-06 6/300 2026-04-08 10:40 by 逆水乘风
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +12 zyx上岸! 2026-04-04 12/600 2026-04-07 02:09 by BruceLiu320
信息提示
请填处理意见