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waldenpond金虫 (著名写手)
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PCR后凝胶电泳条带时有时无是怎么回事？
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我上个月底做了一次RT-PCR（逆转录半定量），做完之后跑了一次凝胶电泳，结果还凑合。 这两天我又将提的RNA逆转录，PCR，跑电泳，却发现其中几个条带没有了（有几条很暗，有几条就直接没有）。连续逆转录、PCR了两次，结果都是如此。 其中有4条是内参照（β-actin），却只有两条是正常的，其余两条看着条带很暗，几乎没有，内参照应该是恒量表达的，条带无论何时应该是同样亮度，而且比较亮的。 还有4条是目的条带。这4条条带之前一次PCR还是有的，亮度也还可以，但是这一次却只有一条有，其余几条也是很暗，几乎看不出来。 我想了又想，就是找不出是什么原因。1.凝胶电泳加样的问题应该可以排除，因为今天我跑了两次结果都是这样，加样应该不存在问题的。2.样本的问题也应该可以排除，因为上一次可以做出来。3.逆转录、PCR（所加引物和体系）的问题，好像不是，因为我连续做了两次都出现了同样的问题。 各位大侠帮忙看一下到底是什么问题啊。先谢谢了！  PS：电泳图片是我用画图画出来的，大体可以表示我的问题，各位大侠凑合着看吧，呵呵！  [ Last edited by waldenpond on 2011-4-20 at 08:51 ] |
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