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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后凝胶电泳条带时有时无是怎么回事？
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waldenpond

金虫 (著名写手)

[求助] PCR后凝胶电泳条带时有时无是怎么回事？

我上个月底做了一次RT-PCR（逆转录半定量），做完之后跑了一次凝胶电泳，结果还凑合。
这两天我又将提的RNA逆转录，PCR，跑电泳，却发现其中几个条带没有了（有几条很暗，有几条就直接没有）。连续逆转录、PCR了两次，结果都是如此。
其中有4条是内参照（β-actin），却只有两条是正常的，其余两条看着条带很暗，几乎没有，内参照应该是恒量表达的，条带无论何时应该是同样亮度，而且比较亮的。
还有4条是目的条带。这4条条带之前一次PCR还是有的，亮度也还可以，但是这一次却只有一条有，其余几条也是很暗，几乎看不出来。
我想了又想，就是找不出是什么原因。1.凝胶电泳加样的问题应该可以排除，因为今天我跑了两次结果都是这样，加样应该不存在问题的。2.样本的问题也应该可以排除，因为上一次可以做出来。3.逆转录、PCR（所加引物和体系）的问题，好像不是，因为我连续做了两次都出现了同样的问题。
各位大侠帮忙看一下到底是什么问题啊。先谢谢了！

PS：电泳图片是我用画图画出来的，大体可以表示我的问题，各位大侠凑合着看吧，呵呵！



[ Last edited by waldenpond on 2011-4-20 at 08:51 ]
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1楼 2011-04-19 23:57:59
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励新虫参与交流 2011-04-20 17:12:06
建议你重新提取RNA，重新反转录再扩增
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在等待中涅槃重生
2楼2011-04-20 16:32:25
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waldenpond

金虫 (著名写手)
看来只有这个办法了，呵呵！谢谢你！
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3楼2011-04-20 16:56:37
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
RNA放了太久的话，有可能降解了，还是再提RNA试试。
一般提完RNA后马上做反转录最好。剩下的RNA我们都不再用的，呵呵~

[ Last edited by 西瓜 on 2011-4-20 at 17:19 ]
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4楼2011-04-20 17:14:29
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小頔子-Fan

新虫 (小有名气)
我也出现了  这样的问题 。后来发现是不是模板浓度的问题，尝试加大浓度再试试。
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5楼2012-07-21 21:32:40
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乌和尚

木虫 (小有名气)
你重新提取RNA，重新反转录再扩增
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6楼2014-01-29 22:26:23
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