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dongfangzz

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR后电泳出现两条带是怎么回事?已有10人参与

PCR后电泳出现两条带,一条是约170bp。另一条是200多bp,目的带是100多的。
这是什么原因?

模板是RNA逆转录之后的cDNA。
引物应该没问题,因为用同样的反应条件,同样的引物,有的cDNA模板不出现多余的条带。
那是模板的问题吗?
怎么避免呀?

[ Last edited by dongfangzz on 2010-9-15 at 23:35 ]
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plantaqp

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该是非特异性扩增
2楼2010-09-15 05:22:28
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czjlove

禁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽

3楼2010-09-15 10:10:12
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zhandeguo1

银虫 (小有名气)

PCR


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板纯吗?还是本来就是杂合子。
4楼2010-09-15 10:15:08
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hcoohboy

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+2):很全面 2010-09-15 10:54:56
引物做过blast吗?特异吗?
你的模板是cDNA还是基因组DNA?
你的退火温度优化过吗?一般提高温度会去除非特异性。
最初的梦想绝对会到达
5楼2010-09-15 10:44:01
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fykxy_206

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
特异性不好
6楼2010-09-15 10:44:04
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8lzq-2009

木虫 (正式写手)

G-4


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一定是你的模板不纯,有两种物质在里面了。
相信才会有奇迹
7楼2010-09-15 12:19:25
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zdmei

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-09-15 23:41:46
可能是引物有错配,不过你应该提供更详细的信息,模板是gDNA,cDNA还是质粒,退火温度多少...可以切胶回收送测序看看是不是你要的序列
8楼2010-09-15 12:39:39
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dongfangzz

银虫 (小有名气)

模板是RNA逆转录之后的cDNA。
引物应该没问题,因为用同样的反应条件,同样的引物,有的cDNA模板不出现多余的条带。
那是模板的问题吗?
怎么避免呀?

[ Last edited by dongfangzz on 2010-9-15 at 23:31 ]
9楼2010-09-15 23:29:24
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tj_fjl

新虫 (初入文坛)

错配,模板污染,非特异性扩增!
10楼2010-09-16 08:51:25
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