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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR后电泳出现两条带是怎么回事？
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dongfangzz

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR后电泳出现两条带是怎么回事？已有10人参与

PCR后电泳出现两条带，一条是约170bp。另一条是200多bp，目的带是100多的。
这是什么原因？

模板是RNA逆转录之后的cDNA。
引物应该没问题，因为用同样的反应条件，同样的引物，有的cDNA模板不出现多余的条带。
那是模板的问题吗？
怎么避免呀？

[ Last edited by dongfangzz on 2010-9-15 at 23:35 ]
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1楼2010-09-14 23:39:36
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plantaqp

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该是非特异性扩增
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2楼2010-09-15 05:22:28
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czjlove

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
3楼2010-09-15 10:10:12
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zhandeguo1

银虫 (小有名气)

PCR

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板纯吗？还是本来就是杂合子。
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4楼2010-09-15 10:15:08
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hcoohboy

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):很全面 2010-09-15 10:54:56
引物做过blast吗？特异吗？
你的模板是cDNA还是基因组DNA？
你的退火温度优化过吗？一般提高温度会去除非特异性。
赞一下(2人) 回复此楼
最初的梦想绝对会到达
5楼2010-09-15 10:44:01
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fykxy_206

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
特异性不好
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6楼2010-09-15 10:44:04
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8lzq-2009

木虫 (正式写手)

G-4
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一定是你的模板不纯，有两种物质在里面了。
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相信才会有奇迹
7楼2010-09-15 12:19:25
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zdmei

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-15 23:41:46
可能是引物有错配，不过你应该提供更详细的信息，模板是gDNA,cDNA还是质粒，退火温度多少...可以切胶回收送测序看看是不是你要的序列
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8楼2010-09-15 12:39:39
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dongfangzz

银虫 (小有名气)
模板是RNA逆转录之后的cDNA。
引物应该没问题，因为用同样的反应条件，同样的引物，有的cDNA模板不出现多余的条带。
那是模板的问题吗？
怎么避免呀？

[ Last edited by dongfangzz on 2010-9-15 at 23:31 ]
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9楼2010-09-15 23:29:24
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tj_fjl

新虫 (初入文坛)
错配，模板污染，非特异性扩增！
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10楼2010-09-16 08:51:25
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