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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？
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286792125

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？已有5人参与

如题
生物学的很差，无奈又调到了生物专业，一切都得从0开始。

还有，
看到文献里有一篇是用单酶切质粒，跑出的电泳图有三条带，不清楚怎么回事

另外，有没有相关的构建载体的书，麻烦给推荐下。
我的课题主要内容是   敲除一个基因再加上去一个基因，完全不知道怎么构建质粒，头疼啊……

问的问题不少可惜金币很有限
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1楼2010-05-09 16:29:33
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
286792125(金币+3):谢谢 2010-05-09 22:13:16
plantaqp(金币+2):欢迎交流 2010-05-10 04:12:05
关于单酶切三条带的问题，你要搞清楚人家所用的载体上面该酶切位点有几个，一般是可能存在两个的，那么之后有可能会跑出三条带，一条是载体片段，一条是目的片段，另一条有可能是没有酶切开的质粒，我经常遇到出现第三条的情况，猜想可能是没有酶切彻底的质粒，一般只要有目的片段就认可为阳性了，其他也不管了
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2楼2010-05-09 20:43:17
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liudeng821111

木虫 (正式写手)
286792125(金币+1):3 2010-05-09 22:13:21
在设计pcr引物时就加进去！
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3楼2010-05-09 21:03:52
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liudeng821111

木虫 (正式写手)
286792125(金币+3):谢谢 2010-05-09 22:13:30
一点没切开，是一条带
全切开，是两条带
没全切开，是三条带
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4楼2010-05-09 21:06:16
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miya173

银虫 (小有名气)
286792125(金币+3):谢谢 2010-05-11 16:43:15
“在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？”
不加启动子基因怎么启动表达。
“看到文献里有一篇是用单酶切质粒，跑出的电泳图有三条带，不清楚怎么回事”
那要看质粒上的酶切位点有几个。
“我的课题主要内容是   敲除一个基因再加上去一个基因，完全不知道怎么构建质粒，头疼啊……”
最好是问问周围的人，知道的信息量太少了没办法回答。
另外建议你多看点基础书，我本科专业与生物毫不相干，现在也在做生物。
基础差不是理由。不用心不行的
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5楼2010-05-11 15:07:31
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一米天堂

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):说的很好~~先从基本概念抓起，多多看书，加油~~ 2010-06-14 21:35:58
引用回帖:
Originally posted by miya173 at 2010-05-11 15:07:31:
“在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？”
不加启动子基因怎么启动表达。
“看到文献里有一篇是用单酶切质粒，跑出的电泳图有三条带，不清楚怎么回事”
那要看质粒上的酶切位点有几个 ...

“在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？”
不加启动子基因怎么启动表达。
“看到文献里有一篇是用单酶切质粒，跑出的电泳图有三条带，不清楚怎么回事”
那要看质粒上的酶切位点有几个。
“我的课题主要内容是   敲除一个基因再加上去一个基因，完全不知道怎么构建质粒，头疼啊……”
最好是问问周围的人，知道的信息量太少了没办法回答。
另外建议你多看点基础书，我本科专业与生物毫不相干，现在也在做生物。
基础差不是理由。不用心不行的
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一米天堂
6楼2010-06-14 13:05:19
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xiangyunch

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢新虫多多交流~~ 2010-06-14 21:36:28
一般的质粒都有启动子的。不需要人工插入，除非你是做某个启动子基因的，可以替换质粒上边的T7 35S等启动子
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7楼2010-06-14 18:12:16
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