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286792125

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子? 已有5人参与

如题
生物学的很差,无奈又调到了生物专业,一切都得从0开始。

还有,
看到文献里有一篇是用单酶切质粒,跑出的电泳图有三条带,不清楚怎么回事

另外,有没有相关的构建载体的书,麻烦给推荐下。
我的课题主要内容是   敲除一个基因再加上去一个基因,完全不知道怎么构建质粒,头疼啊……

问的问题不少可惜金币很有限
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xiangyunch

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢新虫多多交流~~ 2010-06-14 21:36:28
一般的质粒都有启动子的。不需要人工插入,除非你是做某个启动子基因的,可以替换质粒上边的T7 35S等启动子
7楼2010-06-14 18:12:16
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
286792125(金币+3):谢谢 2010-05-09 22:13:16
plantaqp(金币+2):欢迎交流 2010-05-10 04:12:05
关于单酶切三条带的问题,你要搞清楚人家所用的载体上面该酶切位点有几个,一般是可能存在两个的,那么之后有可能会跑出三条带,一条是载体片段,一条是目的片段,另一条有可能是没有酶切开的质粒,我经常遇到出现第三条的情况,猜想可能是没有酶切彻底的质粒,一般只要有目的片段就认可为阳性了,其他也不管了
2楼2010-05-09 20:43:17
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liudeng821111

木虫 (正式写手)

286792125(金币+1):3 2010-05-09 22:13:21
在设计pcr引物时就加进去!
3楼2010-05-09 21:03:52
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liudeng821111

木虫 (正式写手)

286792125(金币+3):谢谢 2010-05-09 22:13:30
一点没切开,是一条带
全切开,是两条带
没全切开,是三条带
4楼2010-05-09 21:06:16
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